从血液中提取dna方法探讨论文

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1、从血液中提取DNA方法探讨论文［摘要］目的：研究从血液中提取DNA的方法以应用。方法：静脉抽取血样，分别抗凝或不加抗凝处理后，提取DNA，通过电泳和PCR进行检测。结果：凝血和抗凝血的DNA产量和纯度分别是(40.2±8.86)mgDNA/L血液和(1.87±0.11)mgDNA/L，(39.1±10.2)mgDNA/L血液和(1.92±0.12)mgDNA/L。所有样本的DNA分子量都很高，从两者的DNA样本中能很容易地扩增出tPA基因的第8内含子区Alu等位基因二态性，因此所提取的DNA是完整可靠的。结论：该方法能快速、简单、有效、无毒地从新鲜血液和凝血中提取DNA，适合于临床检测和

2、分子生物学研究。［关键词］DNA提取;血液;DNA检测DNAIsolationbySimpleRapidandInnocuousMethodfromBloodUsefulinClinicalMolecularTestingAbstract:ObjectiveTostudythemethodofDNAisolationfrombloodforapplication.MethodsDNAinatedbyagarosegelelectrophoesisandPCRfromantiagglutinatingandagglutinatingbloodsamplesthatauricularveins

3、.ResultsTheyieldsandpurityofDNAisolatedfromclottedbloodandantiagglutinatingbloodgDNA/Lbloodand(1.87±0.11).freelgDNA/Lbloodand(1.92±0.12).TheDNAthatallsampleshashighmolecularorphismofAluallelesofthe8thintronoftPAethodisrapid,easy,efficientandinnocuousforisolationofDNAfromclottedandfreshbloodanditi

4、ssuitforclinicaltestingandmolecularbiologystudy.Keyination常规的临床检测实验室中往往要收集大量的未凝结血液，而将凝血丢掉。分子生物学实验中，常用来自EDTA抗凝或枸椽酸钠抗凝的外周血来做DNA来源［1，2］,由于抗凝剂的加入,往往使血浆不能用于检测其他项目。分离完白血球后，多数程序要用酶法消化细胞，然后是用对人体有害的有机溶剂(如酚氯仿)抽提及用乙醇沉淀［3］。为了减少实验检测血液的用量，已有些报道从凝血中提取DNA［3～5］，然而这些技术有些比较不实用，易造成污染，或者比较耗时，要用到酶、RNA去除步骤；有些要求样本体积大，所需

5、试剂在常规的实验室中不具备使用条件等。我们经多次实验并参考其他资料，优化出一种不需要酶而且不使用有机溶剂抽提的程序，能有效地从新鲜血液和凝血中提取DNA，适用于临床检测及分子生物学实验。1材料和方法1.1样本来源静脉抽取30份健康体检者血样。10份用EDTA抗凝,10份不加抗凝处理，10份不抗凝在-40℃冻存2a左右。1.2DNA提取方法取凝血块，用9g/L氯化钠匀浆大约30s，每换一个样本都要用70%乙醇和9g/L氯化钠清洗匀浆器以避免交叉污染。取匀浆后样本1ml置于离心管中，室温8000r离心5min后，去掉上层。血细胞在1ml的Tris缓冲液I(10mmol/LTrisHCl，pH

6、8.0；10mmol/L氯化钾；10mmol/L氯化镁；2mmol/LEDTA，pH8.0；25mL/LTritonX100)中裂解10min,其间轻轻用力充分混匀,室温10000r离心2min，沉淀要用Tris缓冲液I洗2次。将沉淀用220μl的Tris缓冲液II(10mmol/LTrisHCl，pH8.0；10mmol/L氯化钾；10mmol/L氯化镁；2mmol/LEDTA，pH8.0；0.4mol/L氯化钠；10g/LSDS)悬浮，轻轻振荡试管,使底部细胞团块散开，在56℃保温15min裂解。加入100μl5M氯化钠充分振荡沉淀去除蛋白质。10000r离心5min，取上清。加2

7、.5倍体积的无水乙醇沉淀DNA后，10000r离心5min，弃上清。室温晾20min左右待酒精挥发干净后以适量TE缓冲液(10mmol/LTrisHCl，pH8.0，1mmol/LEDTA)回溶。EDTA抗凝血中DNA的提取从去掉上层开始。1.3DNA浓度检测用分光光度计在260nm测DNA浓度。1.4DNA纯度检测DNA的纯度用A260/A280比值表示［3］。结果以均值±SD表示。1.5DNA分子量检测DNA样本的