血液DNA提取方法-试剂盒法.doc

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1、血液基因组DNA流程-DNAextractionKitTiangenDNAextractionkitProtocol使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。1.处理材料：如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞有核细胞，因此处理量20μl，可加缓冲液GA补足200μl后进行下面的裂解步骤。注意：如果需要去除RNA，可加入4μlRNaseA（100mg/ml）溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15sec，室温放置5min。2.加入20μlProteinaseK溶液，混匀。不同组织裂解时间不同，通常需1

2、-3h即可完成（鼠尾需要消化过夜）。3.加入200μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。4.加人200μl无水乙醇，充分振荡混匀15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。6.向吸附柱CB3中加入500μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附

3、柱CB3放入收集管中。7.向吸附柱CB3中加入600μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。8.重复操作步骤7。9.将吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm(~13,400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。10.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加65μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min，12,000rpm(~13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中。注：

4、最后洗脱液可以分2次加入可以提高得率（35μl+30μl）。GenerayDNAExtractionKitProtocol1.血液处理：在1.5mlEP管中加20μlACD抗凝血，加入200μlTE震荡悬浮，充分混匀。2.在上述处理好的200μl样品中加入300μlTBMSolution，充分混匀；再加入2μlBoiledRNaseA，混匀，55℃保温10min；再加入20μlProteinaseK，充分混匀，55℃保温3h。 3.加入300μlPBSolution，再加入300μlCHCl3，充分混匀10min，然后12,000rpm，室温离心10min。4.用1mlT

5、ip头将上清（约700ul）全部转移到套放于2mlCollectionTube的GenCleanColumn柱中。10,000rpm，室温离心1min。5.取出GenClean柱，并倒掉CollectionTube中的废液，将GenClean柱重新放回CollectionTube中，加入600μlWashSolution，8,000rpm，室温离心1min。6.取出GenClean柱，并倒掉CollectionTube中的废液，将GenClean柱重新放回CollectionTube中，加入500μlWashSolution，8,000rpm，室温离心1min。7.取出G

6、enClean柱，并倒掉CollectionTube中的废液，将GenClean柱重新放回CollectionTube中，12,000rpm，室温离心2min，以除去残留的WashSolution，然后静置3min。8.将GenClean柱放入新的已灭菌的1.5ml离心管中，在离心柱膜中央加入65μlElutionBuffer（一般分2次加入：35μl+30μl），室温放置3~5min。12,000rpm，室温离心1min。离心管内液体即为基因组DNA。根据用途，样品可于4℃或-20℃保存。注意：1.将ElutionBuffer加热至65℃，有利于提高洗脱效率。2.进行第

7、二次洗脱可以提高20%~30%的DNA得率。9.用NanoDrop2000测量基因组DNA含量及OD值，OD260值为1相当于大约50µg/ml双链DNA，并通过0.7%琼脂糖电泳凝胶判定DNA的完整性，也可以判定样品中是否有RNA。