种子dna 提取方法

种子dna 提取方法

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时间:2017-12-28

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1、种子DNA提取方法种子DNA的制备  和叶片相比,大多数种子更适用于碱裂解法,然而对于富含多糖和多酚的种子,仍需要使用CTAB来抽提。这些方法对小麦和大豆种子非常有效。  种子的碱性裂解1.在摇床上用2%漂白液清洗种子10分钟后,再用水清洗3次,每次5分钟。2.用灭菌的刀片将种子剖成两半,并放入2毫升管中。3.根据种子大小(大豆种子400μl,小麦种子100μl)加入适量的裂解溶液(100mMTris-HCl,pH9.5,1MKCl,10mMEDTA)。4.95°C孵浴10分钟。5.吸取上清,并取适量用于扩增反应。种子的CTAB抽提法1.

2、在摇床上用2%漂白液清洗种子10分钟后,再用水清洗3次,每次5分钟。2.在液氮中用无菌研杵研磨种子。用500-800μl的CTAB抽提缓冲液(2%CTAB,100mMTris-HCl,1.4MNaCl,20mMEDTA)转移至40ml锥底管中。轻轻混匀后55°C孵浴20分钟。3.1500g离心5分钟。4.转移上清至一个干净管中,加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),轻轻混合2分钟。5.15000g离心20秒。6.将上层液相转移至已预先加入1/10体积7.5M的乙酸铵和2倍体积的冰冷乙醇的管中。7.轻轻混匀后-20°C放置1小时。8.150

3、00g离心1分钟,弃上清。9.用70%的乙醇清洗沉淀两次,每次清洗混匀后15000g离心30秒。10.晾干沉淀后重悬于50μl的1xTE缓冲液中11.吸取适量用于扩增反应。试剂盒FastDNA™-96Plant/SeedDNAKit天根DP320新型植物基因组DNA提取试剂盒(可用于提取植物组织的DNA)

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