毒死蜱对鲤鱼的免疫毒性研究.pdf

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1、THEIMMUNOTOXICITYOFCHLORPYRIFOSONCOMMONCARP(CYPRINUSCARPIOL．)ADissertationSubmittedtotheGraduateSch001ofHenanNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByLiuL{Supervisor：Prof．LiXiaoyuMay，2013摘要毒死蜱(CPF)是广泛应用于农业牛产中的一种高效、低毒的有机磷农药，但对鱼类

2、和水生动物则为高毒。毒死蜱的大量使用对鱼类等非靶标牛物的毒害作用日渐突出。毒死蜱可经鱼类呼吸道、皮肤吸收，丰要分布于肝脏、肾脏、脾脏等血流量比较高的器官，从而引起鱼体牛理生化和代谢功能的变化。有关毒死蜱对鲤鱼的免疫毒性，如对溶菌酶活性、IgM和C3含量以及基因表达的研究尚未见相关的研究报道。本研究以鲤鱼为实验材料，用不同浓度的毒死蜱(15gg／L和75gg／L)处理鲤鱼7d，分别于第l、3、5、7d取血液、肝脏、脾脏、肾脏组织。采用ELISA和实时定量PCR技术分别在蛋白质和基因水平上探讨了毒死蜱对鱼类的免疫毒性，主要实验结果如下：(

3、1)通过上下法得出的毒死蜱对鲤鱼的96h—LC50为149．2ug／L(95％可信限为：126—158gg／L)，说明毒死蜱对鲤鱼的毒性级别为高毒。(2)脏器指数测定结果显示，毒死蜱对鲤鱼肝脏、脾脏、肾脏脏器指数影响不大。(3)通过微孔板MierococcusIvsodeikticus浊度试验测定血清、肝脏、脾脏、肾脏中溶菌酶的活性变化，结果显示，较低浓度CPF(15gg／L)暴露，早期血清、肝脏、脾脏、肾脏中溶菌酶活性增加，但随着染毒时间的增加溶菌酶活性逐渐趋于对照组水平，表明低浓度暴露对鲤鱼的免疫毒害是可逆的；较高浓度CPF(75

4、I-,g／L)处理则抑制了血清、肝脏、脾脏中溶菌酶的活性，对肾脏中溶菌酶活性无影响。(4)通过ELISA检测鲤鱼血清、脾脏、肾脏中IgM含量和C3含量变化，结果显示，CPF暴露抑制了血清、脾脏中IgM的蛋白表达，然而却促进了1肾脏中IgM含量的表达。脾脏C3含量无变化，但血清和l肾脏中C3含量升高。(5)通过实时定量PCR技术检测脾脏和肾脏中IgM和C3基因表达变化，结果显示，IgM和C3基因在暴露前期表达上调，但是在处理后期基因表达下调。(6)本实验结果表明，毒死蜱对鲤鱼具有明显的免疫毒性。关键词：毒死蜱，鲤鱼，免疫毒性，IgM，溶

5、菌酶，C3ABSTRACTChlorpyrifosisoneoftheorganophosphatepesticideswidelyusedinagriculturalpracticesthroughoutworld，whichhasresultedinaseriesoftoxicologicalandenvironmentalproblems，suchasimpactsonmanynon．targetaquaticspecies，includingfish．Ingeneral，CPFislowlytoxictoanimalorhum

6、anwhilehighlytoxictOfish．Chlorpyrifoscanbeabsorbedbyrespiratorytractandskin，andthenmainlydistributeinliver,kidney,andspleeninwhichthebloodflowingisquick，leadingtothechangesofgeneexpression，fishbodyphysiologicalandbiochemicalindexes，andeventoxicityaccordingtotherecentrep

7、ortsHowever,tothebestofourknowledge，therehasbeennoliteratureavailablenowwithregardtotheeffectsofCPF—exposureontheactivityoflysozymeandcontentsofIgMandcomplementC3incommoncarp．Inthisstudy,commoncarpwereexposedtodifferentconcentrationsofCPF(15pg／Land75肚g／L)for7days，thenfi

8、shblood，hepatopancreas，spleen，andkidneyweretakenat1，3，5，7dofexposuretimepoints，respectively，forimmunotoxicanal