罗布泊盐湖可培养放线菌多样性及PKSⅡ功能基因筛选.pdf

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityDISSERTATIONSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementforMASTERDEGREEDiversityofgeneticandPKSIIgenesontheculturedActinobacterialinLopNurByTengYunDirectedbyProf．ZhangXiao·-pingAssociateProf．GuanTong—weiSichuanAgriculturalUn

2、iversity，Chengdu6130，Sichuan，RR．ChinaApril，2014万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：瞵麸关于论文使用授权的声明矽，争年多月／2日本人完全了解四川

3、农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。权。蚵笨论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本授(请在以上口内划“4")研究生签名：导师签名：狲了年月日额厂晦多月产万方数据捅斐盐环境作为极端环境微生物研究的重要组成部分，具有分布广泛，条件相对温和等特点，蕴含着大量的极端放线菌，是极端放线菌生长的理想场

4、所。盐环境中的放线菌能产生如抗生素、耐盐胞外酶、甜菜碱等多种次级代谢产物，在医药工业、农业生产、环境保护等方面有重要的应用价值。研究盐环境中的放线菌多样性，有利于放线菌物种和代谢产物资源库的丰富。位于新疆若羌县东北部的罗布泊盐湖气候条件特殊、地质结构高度盐漠化。本研究的目的是为了挖掘其生境中可培养放线菌的资源和探索该环境中放线菌产生II型聚酮合成酶(PKSII)基因的潜能。以罗布泊盐湖环境的土壤样品为研究对象，采集到lO份样品，采用6种不同盐浓度和7种选择性培养基分离放线菌，提取DNA进行16SrDNA扩增和1

5、6SrDNA全长测序，并将序列进行Blast比对。研究结果表明共获得32株不同的放线菌，分布在放线菌目的6个亚目中的6个属内，其中，链霉菌属(Streptomyces)有15株，占全部获得纯培养菌株的46．9％，是该环境最优势的放线菌类群；其次是拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)有13株，是处于第二优势地位的放线菌类群；还分离到一些糖霉菌属(Glycomyces)、放线多孢菌属(Actinopolyspora)、微球菌(Micrococcus)矛tl栖白蚁菌属(Isoptericola)的菌株。有2株放线

6、菌的16SrDNA基因序列与已有效发表菌株的序列最大相似度小于97％，菌株编号SCAU—A一57与Nocardiopsisaegyptia最大序列同源性仅为97％；而菌株编号SCAU—A-26与Glycomyceshalotolerans最高相似性仅为94％，为潜在的放线菌新分类单元。为了探索嗜盐放线菌产生天然产物的潜力，选取获得的32株放线菌，通过兼并引物进行II型聚酮合成酶(pKSII)功能基因KS域的PCR扩增，其中22株菌扩增出目的DNA片段，阳性率为69％。对阳性片段进行转化并测序，均被鉴定为PKSI

7、I功能基因。这些具有PKSII功能基因的菌株分属于拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)、链霉菌属(Streptomyces)和微球菌属(Micrococcus)三个属，其中链霉菌属中PKSII基因阳性率最高，占80％。本研究结果表明，罗布泊盐湖地区放线菌具有丰富的放线菌资源多样性，并蕴藏一定的放线菌新类群。另外，盐湖放线菌菌株都具有产生聚酮化合物的巨大潜力，本研究结果为进一步开发利用盐湖生态放线菌资源提供了科学依据。关键词：罗布泊盐湖；放线菌多样性；系统发育；PKSII万方数据AbstractAsartim

8、portantpartofextremeenvironmental，saltenvironmentwaswidelydistributed，relativelymildconditions，whichcontainsalargenumberofextremeactinomycetes，Salttolerantactinobacteriacanproduceextracellularen