流产布鲁氏菌胞内诱导基因鉴定及bab2-1152、bab2-1118和bab1-1222基因的研究.pdf

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1、流产布鲁氏菌胞内诱导基因鉴定及bab2—1152、bab2—1118和babl一1222基因的研究IdentificationofBrucellaabortusIntracellularInduced’GenesandStudyofbab2—1152，bab2_1118andbabl一1222Genes研究生：瞿晶学科：预防兽医学导师：彭大新教授于圣青研究员扬州大学兽医学院二。一四年六月瞿晶流产布鲁氏菌胞内诱导基因鉴定及研究流产布鲁氏菌胞内诱导基因鉴定及bab2—1152、禾口babl1222基因的研究研究生：瞿晶导师：彭大新教授

2、于圣青研究员中文摘要bab21118洲IIIIJlllllllrllMIIIfY2633009布鲁氏菌病是一种重要的人畜共患病，其病原布鲁氏菌是一种兼性胞内寄生的革兰氏阴性菌，布鲁氏菌无经典的毒力因子，如质粒、荚膜，外毒素等，其毒力主要体现在入侵宿主细胞并在其中繁殖的能力。因此鉴定布鲁氏菌胞内诱导基因对于研究其致病机制具有重要的意义。在实验室前期研究中，我们通过基因芯片技术比较分析巨噬细胞内流产布鲁氏菌与体外培养条件下流产布鲁氏菌基因转录差异。在本研究中，我们建立了一种qRT-PCR方法检测布鲁氏菌胞内诱导基因的方法，通过特殊的细

3、胞裂解液裂解细菌、固定细菌RNA的方法，成功分离了感染小鼠巨噬细胞的胞内细菌，通过qRT-PCR方法筛选鉴定了部分基因芯片中筛选的差异基因，鉴定了14个布鲁氏菌胞内环境中明显上调转录的基因，分别为bab21152，bab21118，babl1843，babl0596，babl1222，bab20707，bab20128，babl一0211，bab2—0436，bab2—0436，bab2—0060，babl一1952，babl一0296，bab2一∞矽。对这些基因进行分析发现，它们参与了多种生物学功能，如信息存储和处理，细菌代谢等

4、。说明布鲁氏菌在胞内环境中存活是通过一系列复杂的调控机制来实现的。布鲁氏菌胞内诱导基因bab21152编码AraC样转录调控子，为进一步研究该基因的功能，在本研究中，我们通过基因定向缺失技术成功构建bab21152基因缺失株(A1152缺失株)，通过粘附和入侵试验显示，△1152缺失株增强了粘附巨噬细胞的能力，没有增加入侵巨噬细胞的数量，但其入侵效率明显低于野生株$2308，表明A1152缺失株减弱了入侵巨噬细胞的能力。胞内存活试验显示bab21152基因缺失后并不影响布鲁氏菌胞内存活的能力。胞内诱导基因bab21118和babl

5、1222分别编码布鲁氏菌的原儿茶酸2，3双加氧酶(Hpcd)和碱性磷酸酶(PhoA)，为进一步研究该蛋白的特性，在本研究中，我们在大肠杆菌中成功表达了印cd和phoA基因，免疫小鼠后成功制备获得了鼠抗Hpcd和PhoAII扬州大学硕士学位论文多克隆抗体，免疫印迹试验显示，Hpcd和PhoA蛋白具有良好的免疫原性和反应原性，可能是一种有效的候选保护性抗原。总而言之，本研究中成功建立了一种胞内诱导基因鉴定方法，通过定向缺失技术研究了bab21152基因的功能，成功表达了胞内诱导基因Hpcd和phoA，为进一步研究布鲁氏菌胞内存活机制提

6、供理论研究资料。关键词：流产布鲁氏菌，胞内诱导基因，bab21152，bab21118，babl1222瞿晶流产布鲁氏菌胞内诱导基因鉴定及研究IIIIdentificationofBrucellaabortusIntracellularInducedGenesandStudyofbab2—1152，bab2_1118andbabl一1222GenesM．S．candidate：JingQuAdvisor：Prof．DaxinPeng，Prof．ShengqingYuAbstractBrucellosisisanimportantz

7、oonoticdisease，andthecausativeagentisBrucellaspp．，whichisaspeciesofGram·negative，facultativeintracellularbacterium．Brucellahasnoclassicalvirulencefactors，suchasplasmid，capsulesandexotoxins．VirulenceofBrucellaspp．reliesontheabilitytoinvadeintoandsurvivewithinhostcells．

8、SoitisofgreatsignificanceforBrucellapathogenesisresearchtoidentifyinducedgeneswithinhostcells．Inpreviousstudy,DNAmicroarrayw