【精品】果蝇的培养.doc

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1、1.把50或100ml的三角瓶(数冃根据自己试验确定)洗干净,干燥。(能够高温灭菌也好,似乎没那必要)2.配培养基。培养基比例:蔗糖13g,琼脂1.5g,玉米粉17g,水(单蒸水就可以)180ml。乙酸2ml(可少一点),酵母粉至少1.4g培养基配制步骤:(1)称取玉米粉17g装入烧杯1(耍大一些的烧杯,如50()ml),諏水90mlo先加少量水于烧杯中,搅拌成均匀的糊状,再加入具余的水,搅拌均匀。然后一边在电炉上加热,一边搅拌。直到完全煮熟。冒泡泡以后,火小点,免得溢出来。冒泡泡以后还是要再煮好一会。要充分煮熟,要不培养基在培养过程中,果蝇没有吃完

2、就发酵了,果蝇会死的。煮好了放在一边。(2)称取蔗糖13g,琼脂1.5g装入烧杯2,量取水90mlo加入大半水于烧杯屮,一边加热一边搅拌。完全煮溶。(3)把烧杯2中煮溶的蔗糖和琼脂倒入烧杯1中,用步骤2剩余的水冲一冲烧杯,也倒入烧杯1中。(如果烧杯1小,就装不到了。)然后搅匀,继续搅拌加热,直到沸腾,充分混匀。(4)待烧杯1稍凉。这个时候把干燥好的三和瓶摆放旁边。将至少1.4g酵母粉加入烧杯1搅匀,将培养基倒入三和瓶中(耍用卖油翁的技术,这个你没问题,就是不要把培养基沾到瓶壁或周I韦I,浪费也不好看)。(按照敬老师的说法耍待烧杯1凉到80度左右,我觉

3、得稍凉就好了。因为加入酵母粉后还搅拌,就更凉了。倒入三角瓶时,到后边就太凉了有点凝固,不好倒,还会沾到瓶壁上。)(5)把倒好的培养基放到超净工作台上,放2天,等待瓶壁和培养基上的水分挥发。有水残留的话,果蝇放进去翅膀打湿,飞不起来,就翘翘了。(我自己的做法是配培养基的时候少加10ml的水,等待一天,没有完全干,但也可以用)由于果蝇是吃里面生长的酵母,所以培养基放上三天,有酵母生长了就可以接种果蝇了。(6)我自己收集呆蝇的方法:放一点水果在矿泉水瓶子中,至少耍四五天才会有很多果蝇。这儿天的时间就赶快去准备其他的东西。培养基弄好了,就把瓶子收起來,带实验

4、室去接种。果蝇的培养条件是20-25度,25度以上的温度不好的,不记得原因了。20度以下生长慢。一、实验冃的通过对链他霉杂交所产生的子囊他子的观察,了解分离和交换现象,并进行统计,计算交换值。二、材料及生活史1.材料:粗糙链JfiW(NeurosporecrassaT真菌类,子囊菌纲,球壳脉抱菌属,乂称为红色面包霉。2.生活史:粗糙面包霉的营养体是由单倍性(n=7)的多核菌丝组成的。生殖方式有无性生殖和有性生殖两种。无性生殖是菌丝片段或分生抱子经有丝分裂宜接发育成菌丝体。有性生殖是不同接合型的菌丝产生有性也子的过程,主要冇两种方式:(1)未受精的营养

5、体菌丝上产生灰白色的原子囊果,可以接受另一不同接合型的分生他子,通过杂交形成合子。(2)不同接合型的菌丝靠在一起,通过核融合产生界核体。两种有性生殖方式形成的二倍性合子都可以经减数分裂形成四个子细胞,每个子细胞乂经一次有丝分裂形成8个子细胞,进一步发育形成8个子囊抱子,并以一定顺序排列在子囊中,许多子囊乂被包在黑色的子囊果中。若两个亲代菌株有某一遗传性状的差异,那么经杂交所形成的子囊必定有四个子囊也子属于一种类型,其它四个子囊抱子属于另一类型。成熟的子囊砲子在适当条件下可发育成菌丝,形成新的一代。它们的子囊他子的性状的分离比例是严格的1:1,而且有一

6、定的顺序。不同接合型的子囊他子具有黑色、白色两种类型,在子囊中8个子囊抱子常呈4黑4白的排列方式,因此可在显微镜下直接观察基因的分离现彖。当基因发生了互换时,8个子囊抱子乂会排列成2黑2白2黑2白或排列成2黑4白2黑或2白4黑2白,因此在显微镜下也可以观察基因的连锁互换现象。三、材料的优点1.野生型的子囊砲子成熟较早,在一定时期呈现黑色,赖氨酸缺陷型的子囊饱子成熟较晚,在一定时期呈现灰白色。以上两种接合型的粗糙链砲霉杂交在适当时期可以观察到六种子囊类型。2.子囊他子排列的顺序固定,可直接观察到基因的交换。3•可以计算基因与着丝粒的距离。4.如果出现A

7、6、a2>A5、a3则表示基因转变。五、实验步骤1•菌种活化:为使菌种生活得更好,先耍进行菌种的活化。从冰箱中取岀保存的野生型和Lys缺陷型的原种,在无菌条件下分别接种在两支完全培养基试管的斜面上,28°C温箱培养5・6天左右。直至在试管中长成许多菌丝,并且在菌丝上部有许多分生鞄子吋表明菌种活化成功。2.杂交:取野生型和Lys缺陷型的少许菌丝接种到同一•试管的玉米琼脂培养基上,共接两支试管;或者将两种菌丝分别接种到培养川L中“桥,,的两侧。在25°C恒温箱屮培养2・3周,直至在菌丝上有子囊果出现,子囊果为棕黑色,用银子或解剖针触摸时有坚实感。3.观察

8、:(1)在长有子囊果的试管中加少量无菌水,摇动片刻,把水倒在空三角瓶屮,加热煮沸,以防止分生抱子飞扬。(2)

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