微生物生化鉴定.doc

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1、常用生化试验%1.糖、醇发酵试验1•糖、醇发酵试验原理：各种细菌因含有发酵不同糖、醇的酶，所以分解糖、醇的能力个不相同。有的能分解某些糖、醇类，冇的则不能分解。冇的分解某些糖、醇类发酵产酸产气，冇的仅产酸，而不产气。根据这些特点，可鉴别细菌。培养基：糖发酵试验应用的培养基种类很多，人致可分为液体，半固体，固体（高层、斜而）等儿类。可根据试验的要求和细菌的特性来选择。2.乙酰甲基甲醇试验（V-P试验）原理：某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产牛丙酮酸，并将丙酮酸脱竣，变为乙酰甲基甲醇,乙酰甲基甲醇在碱性环境下，被空气屮的氧氧化成二

2、乙酰，二乙酰与培养基内蛋白豚屮精氨酸所含的脈基起作用，牛成红色的化合物。故在培养基屮加入少量含呱基的化合物，如肌酸、肌酊可增加呱基含量。试验中加入的a-蔡酚为催化剂，可加速此反应，使反应颜色增加，提高反应的頌感性。大肠埃希菌不能将丙酮酸脱竣，故V-P试验呈阴性。培养基：磷酸盐葡萄糖蛋口月东水培养基3.甲基红试验（MR试验）原理：许多细菌如大肠埃希菌等，分解葡萄糖产住丙酮酸，内酮酸再次被分解，产牛甲酸、乙酸、乳酸等，这样使培养基的PH降至4.5以下。这时加入甲基红指示剂呈红色。若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其

3、他物质（如醇、酮、醛、气体和水等），则培养基的酸度仍在PH6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性反应。培养基：磷酸盐衙萄糖蛋口月东水培养基MUG葡萄糖醛酸卄酶试验原理：细菌的葡萄糖醛酸甘酶在碱性条件下，作用于4-甲基金形酮-B-D葡萄糖醛酸H（4-Methylumbelliferyl-P-D-glucuronide简称MUG）的P葡萄糖醛酸甘键,使其水解，释放的4-甲基伞形酮在366nm紫外灯下产生■蓝白色荧光。培养基：MUG培养基4.卩-半乳糖井酶试验原理：肠杆菌科细菌发酵乳糖，依靠半乳糖甘渗透酶和卜半乳糖苻酶两种不

4、同的酶作用，能水解邻硝酸酚■卩・D半乳糖昔（O-nitrophenyl-p-D-galactopyranoside,ONPG）,而释放出黄色的邻硝酸酚。发酵乳糖的细菌具有上述两种酶，可迅速分解乳糖。迟缓发酵乳糖的细菌只有卩-半乳糖苜酶，而缺少半乳糖营渗透酣或是其活性很弱，不能将乳糖很快运送到菌细胞内，通常需要延长培养时间数天，乳糖才被分解。本实验主要鉴别肠道细菌，乳糖发酵及乳糖迟缓发酵菌为阳性反应，非乳糖发酵酶为阴性。本试验可作为迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定方法。2.葡萄糖氧化■发酵（O/F）试验原理：细菌对糖的代谢分为氧化

5、型和发酵型两种。在冇氧环境下氧化完全，生成二氧化碳和水。在无氧环境下，进行不完全的分解（发酵），牛成酸类、醇类和气体。氧化型的细菌在无氧环境屮，不能分解糖。发酵型的细菌无论在有氧或是无氧的环境屮均可分解糖。葡萄糖氧化-发酵试验有助于假单胞菌、硝酸盐阴性杆菌、粪产碱杆菌的鉴别。培养基：氧化发酵试验培养基3.石蕊牛乳试验原理：牛乳中含有大量的乳糖和酪蛋白，营养丰富，一般细菌均能在英牛长，但各种细菌对这些物质的分解能力不同，可观察的反应也不同，在培养基中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂，可观察到不同的反应结呆。产气荚膜梭菌

6、对牛乳具有强烈的发酵反应，产酸、产气、凝固、U东化几乎同时发生。所产生的气体，可将培养基表层的凡士林冲至管口，牛乳可全被丿冻化变清，这种'暴风雨”样的发酵现象称为“汹涌发酵”，为该菌所特有。乳链球菌可使牛乳培养基产酸、凝固，并可使石蕊还原。培养基：石蕊牛乳培养基%1.氨基酸和蛋白质代谢试验1•靛基质试验原理：某些细菌，如大肠埃希菌、变形杆菌等，能分解培养基蛋白陈中的色氨酸，形成靛基质（□引味）。靛基质无色，•试剂对二甲氨基苯甲醛作用后，形成红色化合物-玫瑰靛基质。木试验常用于肠杆菌科种属鉴别，大肠埃希98%为阳性反应，肺炎克

7、雷伯菌、沙门菌为阴性反应。培养基：胰蛋白腺水培养基2.硫化氢产生试验原理：检查肠杆菌科娥硫化菽试验，是利用细菌对于培养基中硫代硫酸钠或硫酸钠、亚硫酸钠的还原作用，生成硫化氢。硫化氢是无色气体，遇硫酸亚铁或枸椽酸诙钱，产生不溶性黑色沉淀物硫化亚铁。按此原理设计的硫化氢试验，适用于肠杆菌科细菌的鉴定。沙门菌，列劳地枸核酸杆菌，缓慢爱德华菌，莱克勒菌属和变形杆菌属为阳性反应，其他细菌均为阴性反应。在沙门菌属中，亦有硫化氢阴性的菌型，如甲型副伤寒、仙台、猪霍乱沙门菌等，伤寒沙门菌小亦有部分菌株为硫化氢阴性。培养基：三糖铁琼脂或克氏双

8、糖铁琼脂培养基。2.尿素酶试验原理：某些细菌，如变形杆菌具有尿素酚，能分解培养基中的尿素而产生大量的氨，使培养基成碱性，培养基屮的酚红指示剂呈红色。本试验常用语鉴别变形杆菌属。变形杆菌属能分解尿素呈阳性反应，其他肠道细菌的丿求素酶试验多数为阴性反应。培养基：尿素培养基3.明胶液化试验原理：