迈瑞BriCyteE6流式细胞仪介绍.ppt

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1、BriCyteE6流式细胞仪流式细胞仪基础知识目录竞争产品介绍流式细胞术应用迈瑞流式细胞仪BriCyteE6介绍流式细胞仪基础知识流式细胞仪的定义流式细胞仪(flowcytometer)：是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的高科技仪器。可对单个生物颗粒在流动状态进行分子功能水平上的定量定性分析。研究对象：生物颗粒；检测信号：光信号（散射光，荧光）；分析特点：快速，特异，准确，客观，多参数；流式细胞仪基本构造液流系统光学系统电子系统数据分析系统③①流式细胞仪分析流程流式细胞仪检测单个细胞悬液制备样本细胞荧光

2、标记数据分析处理1234FL4FL6FL5(PE-cy7)FL3(PerCP)FL2(PE)FL1(FITC)SS488/10530/30FS488/10585/40785/60670LP491/LP550LP645LP660/20785/60740LP488/10反光镜tvFL6(APC-cy7)FL4(APC)反光镜tvtvtvtvtvtvtvFSCSSCFL1FL2FL3FL5流式细胞仪工作原理常用的激光器和标记单克隆抗体的荧光素488nm激光激发：FITC（异硫氰酸荧光素）：荧光强度可受pH的影响，当pH降低时其荧光强度也随之减弱PE（藻红蛋白）PerCP（多

3、甲藻叶绿素蛋白）：光量子产量并不太高，最好应用在检测表达较高的抗原上PerCP-Cy5.5（叶绿素蛋白偶联物）PE-Cy7（藻红蛋白偶联物）PE-Cy5（藻红蛋白偶联物）PE-TexasRed（藻红蛋白-德州红偶联物）638nm激光激发：APC（别藻青蛋白）APC-Cy7（别藻青蛋白偶联物）荧光素的选择FITC530/30PE585/40荧光补偿++FITC通道信号=PE通道信号=实测实测真实真实由于每一种荧光素分子都发射某一特定波长范围内的光，然而这些荧光的发射光谱会发生部分重叠，有时这种重叠现象非常显著。为了能够在存在荧光泄露的情况下，得到真实的多色荧光发射信号，

4、在流式细胞仪中采用了称之为颜色补偿的方法，通过测得信号经修正得到真实信号加以使用。数据分析-图形类型直方图数据显示散点图等高线图密度图三维图散射光双参数散点图荧光双参数散点图流式细胞仪与几种检验仪器的比较项目流式细胞仪血球仪生化分析仪免疫分析仪测试对象细胞细胞(测量设置全部固定化）血清血清测试目标物理或化学性质（如细胞大小、内部复杂程度、DNA含量）；小分子物质（如抗原，抗体）物理或化学性质（如细胞大小、内部复杂程度、DNA含量）化学成分和一些小分子物质（如钾、钠、钙、酶）小分子物质（如抗原、抗体、激素）测试原理流式细胞术+抗原抗体反应流式细胞术化学比色法抗原抗体反应

5、计量百分比或绝对计数（如%、**个/uL）；物质的量或定性判定（L、UI/L、阴性、阳pmol/m性）百分比和绝对计数（如%、**个/L）物质的量（mol/L）物质的量或定性判定（L、UI/L、阴性、阳pmol/m性）宏观和微观测量宏观对象（细胞）上的微观物质（抗原、看不见、摸不到）测定宏观对象（细胞）上的宏观物质（物理、复杂度、含量，看得见、摸得到）测量微观物质（可溶性成分和一些小分子物质，看不见、摸不到）测量微观物质（小分子物质，看不见、摸不到）输出流式细胞术应用临床研究血液，肿瘤，药理，免疫…生物学研究遗传，生殖，微生物，细胞生物，毒理，分子生物…农业畜牧业选种

6、，育种…环境研究湖泊，海洋生态研究…食品制药工业食品检测、药物筛选，疫苗研究…流式细胞仪的应用主要科室：检验科、中心实验室、血液科、肿瘤科、病理科、肾病研究、免疫中心、…国内三甲医院中流式细胞仪分布图（2012年）流式细胞仪的临床应用主要项目：淋巴细胞亚群分析HLA-B27检测白血病免疫分型急性白血病、慢性淋巴增生性疾病（CLD)/淋巴瘤造血干细胞分析造血干细胞相对计数；造血干细胞绝对计数；阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）诊断CD55/CD59检测血小板相关分析血小板计数、血小板免疫表型分析细胞周期与DNA倍体分析流式细胞仪的临床应用淋巴细胞根据功能分类淋巴细胞种类

7、特异性分子标记T淋巴细胞CD3+B淋巴细胞CD3-CD19+NK淋巴细胞CD3-CD16+CD56+T淋巴细胞根据表面分子分类淋巴细胞种类特异性分子标记T辅助/诱导淋巴细胞CD3+CD4+T抑制/细胞毒淋巴细胞CD3+CD8+淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析的临床应用淋巴细胞亚群分析可以了解机体在不同条件下的免疫功能状态，主要包括细胞免疫功能和体液免疫功能。在临床上，主要用于对免疫系统造成明显干扰的相关疾病的辅助诊断，分析疾病的发病机理，监控疾病的病程进展，观测疗效及监测预后等等。淋巴细胞亚群分析在肿瘤内科中的应用临床意义CD3+CD3+CD4+CD