miR-181b与炎症关系实验解读ppt课件.ppt

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1、MiR-181bandNF-KBInvitroandinvivostudy12细胞实验一：miR-181b对HUVEC功能影响1、TNF-α影响miR-181b表达(A)Real-timeqPCRanalysisofmiR-181binresponsetoTNF-α(10ng/ml)inHUVECs.短时间作用不同时间点作用32、TNF-α作用下，miR-181b影响HUVEC粘附因子表达4蛋白、mRNA、细胞上清三个层面证明ICAM-1、VCAM-1、E-selectin是影响ECs与WBC粘附的主要分子53、TNF-α作用下，miR-181b影响细胞粘附

2、6细胞实验二：miR-181b靶点的确定1、TNF-α(+)(-)，WB筛查靶点只使用了miR-181b-m及对照72、荧光素酶报告系统实验1、仅使用miR-181b；2、载体使用浓度梯度3、用真核细胞表达载体将miR-181b导入细胞83、miR-181b与靶点结合区域的确认(D)Normalizedluciferaseactivityofareportercontaining3′UTRofimportin-α3,predictedmiR-181b–bindingsites,ormutatedmiR-181b–bindingsites.Thereporter

3、wascotransfectedwitheitherpcDNA3.1emptyvectororpcDNA3.1–miR-181b.*P<0.05.94、miRNP-IP分析靶点mRNA富集(E)miRNP-IPanalysisofenrichmentofimportin-α3mRNAinHUVECstransfectedwithmiRNAnegativecontrolormiR-181bmimics.*P<0.01.1011细胞实验三：miR-181b对下游通路的作用1、荧光素酶报告系统检测miR-181b对NF-κB及VCAM1影响TNF-α(+)(-)条件

4、下，HUVECs中miR-181b对NF-κB活性及VCAM1promoter活性的影响122、miR-181b通过作用于靶蛋白影响NF-κB活性(F)LuciferaseactivityofreporterscontainingtheNF-κBconcatemerincellstransfectedwithmiRNAnegativecontrolormiR-181bmimicsintheabsenceorpresenceofimportin-α3genelackingits3′UTR.*P<0.05.133、miR-181b对HUVECsNF-κB活性的影响

5、144、TNF-α(+)，miR-181b影响NF-κB下游mRNA表达瞬时转染稳定转染153、对下游蛋白表达的影响16Invivo1：miR-181b对粘附因子表达的影响①VCAM-1mRNA及蛋白水平检测尾静脉注射，瞬时转染17②VCAM-1组织原位杂交18③组织水平确定miR-181b靶蛋白19此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！