磁珠法总RNA提取试剂盒说明书.doc

《磁珠法总RNA提取试剂盒说明书.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、磁珠法总RNA提取试剂盒MagBeadsTotalRNAExtractionKit【目录号】TRE-5010；TRE-5030；TRE-5100；【运输条件】2~25℃；【保存条件】磁珠悬浮液2~8℃；其它组分室温；【试剂盒组成】KitComponent试剂盒组成ComponentVolume试剂量TRE-5010（100T）TRE-5030（300T）TRE-5100（1000T）ARE-BufferML裂解液100mL300mL1000mLARE-MagneticBeads磁珠悬浮液2mL6mL20mLWashBuffer1清洗液130mL（加入30mL异丙醇）90mL（加入90mL

2、异丙醇）300mL（加入300mL异丙醇）WashBuffer2清洗液215mL（加入60mL乙醇）45mL（加入180mL乙醇）150mL（加入600mL乙醇）EluteBuffer洗脱液10mL30mL100mL【注意事项】1.磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；2.清洗液1使用前请按照瓶身标签描述加入异丙醇，稀释备用；3.清洗液2使用前请按照瓶身标签描述加入无水乙醇，稀释备用；4.建议使用新鲜或4℃存放少于3天样本进行提取，反复冻融导致核酸得量明显降低；5.请仔细阅读本说明书，并严格按照操作步骤完成操作。【产品简介】本试剂盒适用于从植物材料、动物组织

3、、各种微生物、培养细胞等样本中提取总RNA。试剂盒采用独特分离作用的纳米磁珠和缓冲液体系，磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对核酸具有极强的富集能力，当条件改变时可以可逆的释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。试剂盒经过磁珠与核酸结合、清洗、洗脱等步骤，最大限度的去除了蛋白质及其它杂质，所得RNA产物纯度优良，可直接应用于酶切、PCR、qPCR、文库构建、测序等各种下游分子生物学实验。【试剂盒说明】样本类型样本量RNA得量范围植物材料100mg100~400μg动物组织100mg100~800μg培养细胞1×107个80~300μg各种微生物1×107个100~800μ

4、g【自备仪器、耗材和试剂】仪器自动版英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、EP管离心机、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、EP管、无水乙醇、异丙醇以及氯仿、PBS溶液（1×）。手动版水浴锅或金属浴、EP管离心机、涡旋振荡仪、EP管、EP管配套用磁力架、无水乙醇、异丙醇、氯仿、PBS溶液（1×）。【手动版操作步骤】1.样本前处理及裂解1）贴壁培养细胞倒弃培养液，用PBS溶液（1×）冲洗一次，按照每10cm2生长细胞中加入1mL的比例加入裂解液，轻微晃动使裂解液均匀分布于细胞表面，将内含细胞的裂解液转移至EP管中，涡旋振荡至无明显颗粒物，室温静置5min。2）悬浮培养细

5、胞将悬浮培养细胞连同培养液一起转入EP管中，4℃、8,000g离心2min，吸弃上清液，注意勿破坏细胞沉淀。按照每5~10×106个细胞中加入1mL的比例加入裂解液，涡旋振荡至无明显颗粒物，室温静置5min。1）动物组织、植物组织将新鲜或超低温保存的样本（≤100mg）液氮研磨至粉末状，尽量全部转移至EP管中。向EP管中加入1mL裂解液，涡旋振荡至无明显颗粒物，室温静置5min；1.分离RNA层向裂解完毕EP管加入200μL氯仿，盖紧EP管盖，用力震摇混合溶液至乳浊液，室温静置5min。4℃、12,000g离心10min，从离心机中小心取出EP管，内部匀浆液分为三层，小心吸取最上层无色溶

6、液并转移至新的EP管中。2.核酸结合向EP管中加入400μL异丙醇和20μL提前摇晃均匀的磁珠悬浮液，高速涡旋振荡5min。3.磁性分离将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，如EP管内盖有磁珠残液，可保持EP管在磁力架上，整体上下颠倒2~3次使磁珠被吸附完全。吸弃上清液，避免接触磁珠。4.清洗1）向EP管中加入600μL清洗液1，用移液枪吹散磁珠，涡旋振荡2min，参照步骤4进行磁性分离。2）使用600μL清洗液2，参照步骤5(1)操作2次。5.除醇将弃尽上清液后的EP管保持于磁力架上，打开EP管盖室温晾干约8min至无明显乙醇味。6.洗脱向EP管中加入30~100μL洗脱液，涡

7、旋振荡至磁珠全部分散于液相中，58℃温浴5min，每隔2min涡旋振荡10s。7.核酸转移洗脱完毕，将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP管中，提取过程完毕，此时可弃去磁珠。【仪器自动版操作步骤】本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32份样本的提取工作。1.96孔板准备参照下表用量向96孔板各孔位中分别加入相应试剂：96孔板孔位1、72、83、94、105、116、