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时间:2020-03-14
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1、生化鉴定类实验此类实验是利用物质的一些特性来鉴定该物质,因此物质的特性及常用的鉴定方法必须牢牢掌握。高巾生物学教材中相关的实验有:①生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定;②叶绿体中色素的提取和分离;③DNA的粗提取与鉴定。中学阶段,最常用的提取、分离方法是利用各种物质溶解度的差异进行盐析或层析;最常用的鉴别(定)方法是利用各种物质特定的显色反应,此法应严格控制样品的量,和排除其他有关物质的干扰,最常用的定量方法是滴定法和比色法。-、实验:生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定1.实验原理:某些化学试剂能够使生物组织中的有关化合物,产生特定的颜色反应。 还原糖+斐林试剂
2、→砖红色沉淀脂肪+苏丹Ⅲ染液→橘黄色显色反应 脂肪+苏丹Ⅳ染液→红色蛋白质十双缩脲试剂→紫色反应2.方法步骤:还原糖的鉴定:选材→制备组织样液→鉴定样液。脂肪的鉴定:选材→切片制作→染色→镜检鉴定。蛋白质的鉴定:选材→制备样液→鉴定样液。3.注意事项:(1)本实验成功与否的关键在于实验材料的选择,为提高实验效果,应根据当地实际情况,精心选择含糖量较高,富含脂肪、蛋白质的生物组织或器官作为实验材料。选好实验材料,实验则成功了一半。(2)用于鉴定还原糖的生物组织,最好选含糖量较高,而组织颜色较浅,或近于白色的,如苹果和梨的果实。经试验比较,颜色反应的明显程度,依次为苹
3、果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。(3)用于鉴定脂肪的实验材料最好选择富含脂肪的种子,如花生种子取其子叶,供实验用的花生种子必须提前浸泡3~4h(以宜于制作临时装片为准)。浸泡时间短了不容易成切片;浸泡时间过长,则组织太软,切下的薄片不易成形。(4)用于鉴定蛋白质的植物材料,应提前浸泡1~2d,便于研磨。(5)斐林试剂极不稳定,其甲液和乙液需分别配制、储存,使用时再临时混合均匀用于实验。(6)双缩脲试剂的使用,应先加试剂A,造成碱性环境,再加试剂B。(7)在可溶性糖的鉴定中,对试管中的溶液加热时,试管底部不要触及烧杯底部;试管口不要朝向实验者,以免溶液沸腾时冲出试管造成烫
4、伤。(8)蛋白质的鉴定如果是用稀释液,浓度不能太大,以免实验后粘住试管壁,不易洗净。【例1】下列关于实验操作步骤的叙述中,正确的是A.用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液,可直接用于蛋白质的鉴定B.脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的脂肪滴C.鉴定可溶性还原糖,要加入斐林试剂甲液摇匀后,再加入乙液D.用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后,再加入含样品的试管中,且必须现混现用[解析]本题在于考查学生的操作是否规范、正确,是否注意了不同鉴定实验之间的差别。斐林试剂与双缩脲试剂所用漆质相同,且所用氢氧化钠溶液的浓度相同,但二者所用的硫酸铜的质量浓度
5、不同。鉴定可溶性还原糖时,是甲、乙液现混现用,一次加入。而鉴定蛋白质时要先加A液,再加B液。还原糖、蛋白质的颜色反应走试剂与其发生化学反应的结果,足肉眼可见的。脂肪的鉴定中,由于脂肪滴小且分散在细胞中,所以需要借助于显微镜观察。[答案]B[变式1]将面包围包在纱布中在清水中搓洗,鉴定黏留在纱布上的黏稠物质和洗出的白浆用的试剂分别是A.碘液、苏丹Ⅲ溶液B.双缩脲试剂、碘液C.斐林试剂、苏丹Ⅲ溶液D.碘液、斐林试剂二、实验:叶绿体中色素的提取和分离1.实验原理:叶绿体色素能溶解在有机溶剂中,如丙酮;叶绿体色素在层析液中的溶解度不同,随层析液在滤纸上扩散的速度也不同。2.
6、方法步骤:提取色素→制滤纸条→滤液画线→纸上层析→观察结果。3.注意事项:(1)要选取新鲜色深的叶片作实验材料,以便使色素液中含有较多的色素。(2)研磨时一定要快速充分。(3)过滤时要用脱脂棉(或单层尼龙纱布),不能用滤纸。(4)滤液细线画得要细而直,否则,在层析时会导致色素带的重叠。要把滤液细线画细画直。应该做到:毛细吸管的管口要细要齐,画线时,速度要快且均匀。(5)画滤液细线时,要重复画2~3次,以便提高色素细线中色素的含量。(6)层析时不能让滤液细线接触到层析液,因为色素容易溶解于层析液中,导致色素带不清晰。【例2】下列为“叶绿体色素提取和分离”实验:(1)在
7、“叶绿体色素的提取和分离实验”中,将叶绿体色素进行分离的方法名称是 (2)某学生在实验过程中将画有滤液细线的滤纸条(已重复几次画线)浸入层折液中,几分钟后取出观察,发现在滤纸条上无色素分带现象,而其他用同一滤液做实验的同学的滤纸条上却色素分带明显。其实验失败的原因可能是 。(3)观察叶绿体色素的荧光现象,可将盛有叶绿体色素溶液的试管,让光线照射。如果置叶绿体色素溶液于光下,则呈绿色;如置于光下,则溶液呈现红色。[解析]此题主要考查叶绿体色素提取和分离实验的知识。用丙酮溶解法可以提取叶绿体色素,
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