鉴定类实验xinkejia

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1、鉴定类实验还原性糖、脂肪、蛋白质、淀粉的鉴定一、实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质思考1．阅读课本P18，完成下列表格：还原性糖淀粉蛋白质脂肪试剂现象思考2．试以葡萄糖为例写出相应方程式：葡萄糖+Cu(OH)2葡萄糖酸+Cu2O↓（砖红色）+H2O思考3．蛋白质检测的反应机制是什么？蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+结合成紫色的化合物。颜色深浅与蛋白质白质浓度成正比。斐林试剂砖红色沉淀碘蓝色双缩脲试剂紫色苏丹Ⅲ染液/苏丹Ⅳ染液橘黄色/红色二、实验原理三．实验材料思考4．做可溶性还原性糖鉴定实验应选择什么样的实验材料？为什么？思考5．做脂肪的鉴定实验应选择什么样的实验材料

2、？．思考6．做蛋白质的鉴定实验应选择什么样的实验材料？选用含糖较高，而且组织的颜色较浅，或近于白色的，如苹果、梨。避免干扰或影响实验结果的正常颜色。．应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。四、实验试剂斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/mLCuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/mLCuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精液，碘液、蒸馏水。思考7．斐林试剂与双缩脲试剂相同吗？为什么？不

3、同；虽然它们的成份都是NaOH溶液和CuSO4溶液配制而成，但它们的溶液浓度不同，使用的原理不同（斐林试剂实质是新配制的Cu(OH)2与还原性糖发生反应，而双缩脲试剂实质是在碱性环境下的Cu2+与肽键发生反应），使用的方法也不同。思考8．上述的酒精溶液起作用？洗去浮色五、方法步骤：1、还原糖检测和观察的操作方法：制备组织样液（去皮、切块、研磨、过滤）→取1支试管，向试管内注入2mL组织样液→向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡→试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色。思考9．为什么苹果或梨组织液必须临时制备？思考10．实验中应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制

4、、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂，为什么？．因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。．斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu(OH)2在70~900C下分解成黑色CuO和水；思考11．实验中能否将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测？为什么？思考12．还原糖溶液检测过程中出现的颜色变化过程是怎样的？不能；因为甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu(OH)2生成，影响实验结果。浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）2、脂肪检测和观察的操作方法：方法一：向待测组织液中滴加3滴苏丹Ⅲ染液，观察样液被染色的情况；方法二：取材→切片→制片→观察思考1

5、3．为什么切片要尽可能薄些？思考14．制片过程中为什么要洗去浮色？思考15．制片过程中为什么要用吸水纸吸去花生子叶周围的酒精？思考16．制片过程中为什么在盖上盖玻片前要滴加蒸馏水？切片要尽可能薄些，便于观察。不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。滴上蒸馏水可防止盖盖玻片时产生气泡。3、蛋白质检测和观察的操作方法：制备组织样液（浸泡、去皮研磨、过滤）→加样液约2ml于试管中→加入双缩脲试剂A，摇匀→再加入双缩脲试剂B液3~4滴，摇匀→观察颜色变化。思考17．检测时为什么要先加双缩脲试剂A液后加B液，而不能同时加入？先加NaOH溶液，为Cu2

6、+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液同时加入，会导致Cu2+变成Cu(OH)2沉淀，而失效。思考18．检测时向试管内加双缩脲试剂B液4滴，为什么CuSO4溶液不能多加？．因为多加CuSO4溶液，Cu(OH)2的蓝色会遮盖反应的真实颜色。4、淀粉检测和观察的操作方法：用试管取2ml待测组织样液→向试管内滴加2滴碘液→观察颜色变化。注意：碘液不要滴太多，以免影响颜色观察。六、应用：例题1：安徽阜阳劣质奶粉事件曝光后，有关部门对收缴的劣质奶粉进行了化验，发现不法商人为了降低成本，在其中添加了大量糖类物质，让婴儿喜欢吃却无法得到足够的蛋白质营养。请回答：(1)长期以劣质奶粉为主食的婴儿会成为“大

7、头娃娃”，这是由于缺乏蛋白质导致血浆渗透压下降，血浆中的大量水分进入造成的。(2)有些劣质奶粉中含有大量还原糖，如果用斐林试剂鉴定，则该试剂与待测样液在试管中混合均匀后，还必须经过处理；预计试管内混合液的颜色变化是。(3)如果用双缩脲试剂鉴定劣质奶粉是否含有蛋白质，那么，将待测样液注入试管之后，注入试剂的顺序应该是。(4)如果劣质奶粉含有大量脂肪，则用苏丹Ⅲ染液鉴定时，预计染液与待测样液混合后的颜