荧光免疫层析技术原理进展ppt课件.ppt

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1、荧光免疫层析技术的原理与进展1荧光免疫层析技术的基本原理层析法(chromatography)的原理是利用混合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)而建立来的一种分离技术。层析系统是由固定相(stationaryphase)和流动(MobilePhase)相组成。2固定相是固体物质或固定于固体物质上的成分。流动相是可以流动的物质，如水或各种溶剂。层析过程：当待分离混合物随流动相通过固定相时，由于混合物各组分的理化性质的差异，与固定相相互作用弱的组分随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移的速度快；与固定相相互作用

2、强的组分向前移动的速度慢。从而实现混合物中各组分的分离。3免疫层析法免疫层析技术是建立在层析技术和抗原一抗体特异性免疫反应基础上的一项新兴免疫检测技术。4免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细作用使待测物在层析条上移动。待测物在T线处发生特异性免疫反应。游离物在C线处发生免疫反应。待测物层析方向免疫反应TC免疫层析技术基本原理示意图5荧光（fluorescence）荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式释放出能量，称为荧光。发射光谱和激发光谱发射光谱是指固定激发波长，

3、在不同波长下记录的样品发射荧光的强度。激发光谱是指固定检测发射波长，用不同波长的激发光激发样品记录的相应的荧光发射强度。6荧光效率定义:荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率计算公式:荧光效率=荧光寿命定义:荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度时所用的时间。各种荧光物质的荧光寿命不同。7荧光淬灭定义:荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。引起荧光淬灭的因素：有如紫外线照射、高温、某些硝基化合物、重氮化合物等。8免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细作用使待测物在层析条上移动。待测物

4、在T线处发生特异性免疫反应。游离物在C线处发生免疫反应。待测物层析方向免疫反应TC免疫层析技术基本原理示意图910竞争法待测物中的某种抗原与T（检测线）线处同种抗原竞争性地与标记抗体相结合的过程。11竞争法含抗原AY1:A的单抗与标记物的偶联体Y2：抗原AY3:羊抗鼠二抗结合垫免疫层析法检测的实物图12夹心法待测物中某种抗体（抗原）与T线处抗原A（抗原A）以及荧光标记的抗原（抗体）特异性相结合的过程，在T线处形成抗体A+抗原+抗体B形式的夹心结构。结合垫免疫层析法检测的实物图13双抗体夹心法(k)Ab1-Ag-Ab2(k)Ab1(k)Ab1-AgAb2Ab3

5、-(k)Ab1TC阳性结果T,C均有颜色待测液含抗原Ag待测液，不含抗原Ag(k)Ab1(k)Ab1(k)Ab1Ab2TCAb3-(k)Ab1阴性结果T无颜色，C有颜色双抗体加心法检测原理图K代表某一标记物结合垫免疫层析法检测的实物图14双抗原夹心法双抗原夹心反应模式阳性检测（左）与阴性检测（右）15利用荧光免疫层析试纸条可以实现对待测物的定性或者定量检测.1617金颗粒之间存在的静电斥力使其在水中保持相对稳定的状态，形成稳定的水溶性胶体，即称为胶体金胶体金18胶体金既有明亮的色彩，又有高电子密度，可以吸附生物大分子，且不影响生物分子的活性，故可作为生物分子

6、的标志物，用于免疫反应中抗原或抗体的标记定位，定性甚至定量研究。层析试纸标记用金颗粒的直径大多在20～40nm，呈深红色。19胶体金标记蛋白质的过程是蛋白被动吸附到金颗粒表面的过程。由于蛋白分子牢固地结合在金颗粒表面，形成一个蛋白层，阻止了胶体金颗粒的相互接触，而使胶体金处于稳定状态。20胶体金作为标志物有以下优势:①几乎可标记所有的蛋白分子，过程简单，效率高，用量少，便宜，基本不改变被标记蛋白的活性。且稳定，无毒，使用方便，保质期长。②不同直径的纳米金可以用于多重标记。③结果判断只需普通光学仪器或直接肉眼观察。21胶体金作为标记物的应用22试孕纸2324应

7、用（定量）08天津大学精密仪器与光电子工程学院与天津市进出口检验检疫局合作开发研发一种便携式仪器。竞争法原理用于农药残留定量检测252镧系元素镧系元素又称为稀土金属元素，指元素周期表中原子序数57～71的所有元素。26两种不同镧系元素离子(分别作为光吸收子和发射子)掺杂入亚微米尺寸的陶瓷颗粒(作为主基质)中，会构成一类能上转发光产生荧光的特殊材料。——UCP(up-convertingphosphor，UCP)颗粒。27UCP颗粒主要含有如下三种成分:主基质：氧硫化物（Y2O2S,GdO2S）、氟化物(YF3,GdF3）、硅酸盐(YSi2O5,YSi3O7）

8、...吸收子Yb3+Er3+Sm3+发射子Er3+H