刺参(Apostichopus japonicus Selenka)对亚硝酸氮胁迫的生理生态学响应及其机制研究.pdf

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1、谨以此文献给我的恩师、亲人、朋友以及所有关心、支持和帮助过我的人们。--------陈芸燕刺参（ApostichopusjaponicusSelenka）对亚硝酸氮胁迫的生理生态学响应及其机制研究学位论文完成日期：2013年3月指导教师签字：答辩委员会成员签字：独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作

2、了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日---------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，

3、授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日刺参（ApostichopusjaponicusSelenka）对亚硝酸氮胁迫的生理生态学响应及其机制研究摘要在水产动物养殖过程中，由于养殖技术低下、养殖管理不规范等，常可造成养殖水体中亚硝酸态氮的大量累积，从而严重影响养殖动物的正常生长、代谢和生存。本论文以刺参（ApostichopusjaponicusSelenka）为研究对象，围绕刺参生长和生理水平对于亚硝酸氮胁迫响应，主要研究了刺参分别在急性和慢性亚硝酸

4、氮胁迫下，生长、能量代谢、免疫应答、热休克蛋白70表达、同工酶谱的变化规律，并从生理生化和细胞水平两方面，初步探讨了刺参对亚硝酸氮胁迫的应答机制，其主要结果如下：1.慢性亚硝酸氮胁迫对刺参生长、呼吸代谢及能量代谢关键酶活性的影响在实验室条件下，研究了不同亚硝酸氮浓度（1.95、3.52、6.25、10.94和19.54mg/L）慢性胁迫（30d）对刺参（湿重50.63±0.72g）生长、呼吸代谢及能量代谢酶活性的影响。实验结果表明，不同浓度亚硝酸氮胁迫对刺参生长、呼吸代谢及不同组织（体腔液、体壁和肌肉束）的能量代谢酶，包括：己糖激酶（HK）、丙酮酸激酶（PK）、乳酸脱氢酶（LDH

5、）、琥珀酸脱氢酶（SDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）、葡萄糖（GLU）、乳酸（LD）、糖原（Glycogen）影响显著。亚硝酸氮慢性胁迫对刺参生长影响显著（P<0.05），刺参的特定生长率（SGR）随亚硝酸氮胁迫浓度的增加而随降低。实验期间，不同亚硝氮浓度处理组刺参耗氧率随着亚硝酸氮胁迫时间的延长呈先升高再降低的趋势。当亚硝酸氮胁迫12d时，刺参耗氧率达到最大值。在不同浓度亚硝酸氮胁迫下，刺参不同组织HK、PK、LDH、SDH、MDH活性和及GLU含量基本呈现先升高后降低的变化趋势，而LD和糖原含量基本呈先降低后升高的变化趋势。2.慢性亚硝酸氮胁迫对刺参免疫酶及热休克蛋白70表达的

6、影响在实验室条件下，研究了不同亚硝酸氮浓度（0.12、2.30、11.50和57.50mg/L）慢性胁迫对刺参（湿重48.96±0.88g）体壁非特异性免疫能力及热休克蛋白（HSP70）表达的影响。结果表明，不同浓度亚硝酸氮胁迫对刺参体壁酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性以及总抗氧化能力（T-AOC）、微量丙二醛（MDA）含量和热休克蛋白70表达量影响显著。刺参在0.12-57.50mg/L浓度亚硝酸氮胁迫下，体壁中ACP、AKP、T-AOC以及LSZ活性均在胁迫初期显著升高，到第20d时，57.50m

7、g/L亚硝酸氮胁迫组刺参体壁中ACP、AKP、T-AOC及LSZ活性均显著低于对照组；低浓度亚硝酸氮（0.12和2.30mg/L）胁迫能够显著提高刺参体壁SOD、CAT的活性，而高浓度亚硝酸氮（11.50和57.50mg/L）胁迫则显著抑制刺参体壁SOD和CAT的活性；刺参体壁中MDA含量随亚硝酸氮胁迫浓度的升高而升高，且随胁迫时间的延长在体壁中的积累量增大；刺参体壁中HSP70的表达量在亚硝酸氮胁迫初期迅速升高至最高，但随胁迫时间的延长而降低并趋于稳定，其最大表达量与亚硝酸氮浓