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1、孕期免疫治疗对母婴外周血单个核细胞中HBVDNA的影响【关键词】乙型肝炎病毒(HBV)摘要：目的探讨乙肝表而抗原(HBsAg)阳性孕妇行被动免疫或联合免疫治疗对母婴外周血单个核细胞(PBMC)屮HBVDNA的影响。方法HBsAg阳性孕妇自孕20周起至分娩前，34例行乙肝免疫球蛋白(HBIG)少量多次肌注(A组),30例行乙肝免疫球蛋白联合乙肝疫苗(HBVac)肌注(B组)，23例不行任何治疗作为对照(C组)。以套式PCR法测定孕妇治疗前、分娩时及新生儿外周血单个核细胞中HBVDNA含量。结果A、B组分别与C组
2、比较，孕妇治疗后PBMC中HBVDNA水平下降率及新生儿PBMC中HBVDAN阳性率均无显著性差异(P>0.05)o结论孕期被动免疫或联合免疫治疗对孕妇PBMC屮HBVDNA无明显影响，亦不能降低新生儿的PBMC屮HBVDNA阳性率。关键词：乙型肝炎病毒(HBV)；乙肝表面抗原(HBsAg)；乙肝免疫球蛋白(HBIG):乙肝疫苗(HBVac):外周血单个核细胞(PBMC)国内外学者对各型乙肝患者及乙肝表面抗原(HBsAg)阳性母儿的研究［1-4］表明，外周血单个核细胞(peripheralbloodmonon
3、uclearcell,PBMC)中均潜伏有乙型肝炎病毒(HBV),并可在其中复制，致自身再次急性感染并感染他人。因此减少母儿PBMC被HBV侵犯具有重大意义。近年来，国内学者对孕妇应用以乙肝免疫球蛋白为主的免疫治疗，通过降低孕妇病毒血症水平，成功地降低了新生儿血清HBsAg及HBVDNA,有效阻断了HBV宫内感染［5,6］,但对孕妇应用以乙肝免疫球蛋白为主的免疫治疗能否影响母儿PBMC中HBVDNA状态，尚无报道。我们对HBsAg阳性孕妇在孕期行被动免疫或联合免疫预防治疗，以探讨不同免疫方法对母儿PBMC中H
4、BVDNA状态的影响。1材料与方法1.1对象及分组在我院产科门诊产前检查随访，并在我院分娩的HBsAg(+)孕妇87例，随机分为A组：被动免疫组30例，B组：联合免疫组34例，C组：对照组23例。三组孕妇在年龄、孕产次、分娩时孕周、分娩方式及用药前HBsAg>HBVDNA检出率等方面经均衡检验无明显差异。所有孕妇无肝炎史、肝功正常，无先兆流产、先兆早产及妊娠期高血压病等。该87例孕妇共分娩新生儿88例(其中A组1例为双胎)，无胎儿窘迫及新生儿窒息等病史。1.2研究方法1.2.1免疫治疗A组孕妇分别于孕20、2
5、4、28、30、32、34、36周及37周后每周肌肉注射HBIG100IU一次，直至分娩；B组每次臀大肌注射HBIG100IU,同时三角肌注射重组乙肝疫苗（HBVac）20ug；C组孕妇整个孕期只随访查体，不予免疫治疗。1.2.2HBVDNA检测孕妇于孕20周前（免疫注射前）和分娩时采肘静脉血3mL,加150IU肝素抗凝；新生儿出生后24h内（HBIG和HBVac使用前）采股静脉血2mL,加150IU肝素抗凝，分别于抽血后2h之内用比重1.077的淋巴细胞分离液常规分离PBMC,用Hanks液洗涤5次，保留最
6、后1次上清100UL,以排除血清HBVDNA污染。分离后PBMC浓度调至6X104/mL,-20°C保存，统一提取HBVDNA。采用套式PCR（nPCR）法测定。引物依HBV基因组相对保守的S区自行设计，由中科院上海细胞所合成。PBMC中HBVDNA第1次扩增阳性称为强阳性，第1次扩增阴性而第2次扩增阳性称为弱阳性。用药前强阳性转为用药后弱阳性或阴转，或用药前弱阳性转为用药后阴性定为HBVDNA水平下降。1.3统计学处理采用SPSS10.0分析软件定性资料用X2检验、校正的x2检验。2结果2.1新生儿PBMC
7、中HBVDAN阳性率检测新生儿PBMC中HBVDNA,A组35例新生儿（其中1例双胎）,11例阳性，阳性率为31.4%；B组30例新生儿，6例阳性，阳性率为20%；C组23例新生儿,8例阳性，阳性率为34.8%。A组与C组比较，无显著性差异(x2=0.071,P>0.05)；B组与C组比较，亦无显著性差异(X2二1.464,P>0.05)o2.2孕妇PBMC屮HBVDNA水平变化分别检测各组孕妇治疗前及分娩时PBMC屮HBVDNA,分娩时A组HBVDNA水平下降8例，其中1例为强阳性转为弱阳性，7例为弱阳性转
8、阴，下降率为75%；B组HBVDNA水平下降6例，1例为强阳性转为弱阳性，5例为弱阳性转阴,下降率为38.4%；C组HBVDNA水平下降2例，均为弱阳性转阴，下降率为13.3%0A组与C组之间无显著性差异(x2二1.823,P>0.05)；B组与对C组之间亦无显著性差异(x2二0.365,P>0・05,)。3讨论Shimizu［7］观察3例血清HBVDNA㈠、PBMCHBVDNA(+)孕妇所娩4例新
