土壤中分解尿素的细菌的分离和计数ppt课件.ppt

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1、尿素分子的立体结构CO（NH2）2+H2O脲酶CO2+2NH3课题21、常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。2、课题目的一、从土壤中分离出能够分解尿素的细菌二、统计每克土壤样品中尿素细菌的数目㈠.筛选菌株PCR技术是一种常用的DNA扩增技术，此项技术的自动化，需要使用耐高温的DNA聚合酶，如果请你来找这种耐高温的酶，你会去哪里找？水生耐高温细菌Taq热泉70-80摄氏度的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而耐热的Taq细菌脱颖而出。启示：寻找目

2、的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。一、研究思路（一）筛选菌株1、实验室微生物的筛选原理（P21）人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。一、研究思路（一）筛选菌株2、选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。•加入青霉素的培养基——细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长•不加含碳有机物的无碳培养基——分离自养型微生物阅读22页本课题使用的培养基配方1.在培养基的配方中，为微生物的生长

3、提供碳源和氮源的分别是是什么物质？碳源是葡萄糖，氮源是尿素2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。二、统计菌落数目一、研究思路（二）微生物计数1、显微镜直接计数法1mm缺点：不能区分死菌与活菌（二）微生物计数2、统计菌落数目——稀释涂布平板法平板菌落数统计注意事项1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个；2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数；3、菌落数目过多时，可以合理采用样方法。恰当

4、的稀释度、正确的涂布操作是成功地统计菌落数目的关键。某班级菌落数统计表格（取样0.1mL,稀释倍数106）组别第1组第2组第3组第4组平板151216519095256820717716235721781881024平均每mL样品中活菌数思考1：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL）A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.413【解析】选B。稀释

5、倍数为106，0.1mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。每mL样品中的菌株数=（C÷V）×MC：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V：涂布平板时所用的稀释液的体积M：稀释倍数思考2：为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活菌的数目？当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。为了保证结果准确，一般选用菌落数在30~300的平板进行计数。思考3：统计的菌落数往往比活

6、菌的实际数目高还是低，为什么？低，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。实例分析1第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。实例分析2想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异如此之大，请分析原因可能有哪些？①②实例分析想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排

7、除上述两个可能影响实验结果的因素吗？一种方案：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。另一种方案：可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验。Ø如果结果与A同学一致，则证明A无误；Ø如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。实例启示实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的！设置对照实验的目的是什么？排除实验操作、培养条件等无关变量对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。一、研究思路实验基本原则1、平行重复原则2、对照原则3、单一变量原则二、实验设计实验

8、名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验原理：实验目的：材料用具：方法步骤：1、分组编号2、处理（遵循实验设计的基本原则）对照原则、单一变量原则（等量原则）科学性原则、平行重复原则可行性原则3、观察记录（设计观察记录表）实验预期：实验结果的分析与评价：设计时请利用P23-P24实验结论：的三个资料实验设计•实验名称：土壤中分解尿