医学毕业论文巨细胞病毒抗原分支肽的合成与鉴定.doc

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1、XX大学毕业论文巨细胞病毒抗原分支肽的合成与鉴定2014年6月25日巨细胞病毒抗原分支肽的合成与鉴定作者：杨赛，刘陶，杨浩，韩锋产，陈五岭【关键词】人巨细胞病毒SynthesisandidentificationofCMVbranchedpeptide【Abstract]AIM:Toinvestigatethesynthesisofhumancytomegalovirusantigenicbranchedpeptide.METHODS:Thelinearpeptideandbranchedmult

2、iplepeptidewithhumancytomegalovirusantigenicepitopeweresynthesizedwithsolidphasechemistryrespectivelyandpurifiedbyHPLC・Thetwopeptidesmolecularmasseswereobtainedbymassspectrumandthenidentifiedwithqualitycontrolserums.RESULTS:Themolecularmassofthelinear

3、peptidewas793.8andthatofbranchedmultipleantigenicpeptidewas7127.77,bothconsistentwiththetheoreticmolecularmass.ThebranchedpeptidedifferentiatedqualitycontrolserumsproperlythroughELISA.CONCLUSION:Thesynthesisofcytomegalovirusantigenicbranchedpeptidegre

4、atlyfacilitatesthepreviouswayforthepreparationofhumancytomegalovirusantigenandhastheadvantageoflowcostandnopotentialbiohazard.[Keywords]Solidphasesynthesis;Humancytomegalovirus;Branchedmultipleantigenicpeptide【摘要】H的：探讨人巨细胞病毒(HCMV)抗原分支肽人工合成方法.方法：用固相合成方

5、法分别合成HCMV抗原表位的线性多肽和分支多抗原肽，经HPLC进行纯化后质谱检验其分子质量，并用质控血清鉴定抗原活性.结果：合成的线性肽分子质量为793.87ku,八分支肽的分子质量为7127.77ku,均与其理论分子质量相符，分支肽经ELISA初步鉴定对质控血清具有较好的分辨效果.结论：HCMV抗原分支肽的人工合成大大简化了以往HCMV抗原的制备方法，且制备成本低，无潜在生物危害.【关键词】固相合成；人巨细胞病毒；分支多抗原肽0引言人巨细胞病毒（humancytomegalovirus,HCMV

6、）为已知最人的人疱疹病毒,能通过唾液、性接触、胎盘、哺乳、输血以及器官或干细胞移植等方式感染人类,引起多种疾病［1,2］.HCMV在发达国家的感染率约为30%〜70%,在发展中国家则达到了90%以上［3］・H前，诊断HCMV感染的主要手段为血清学检测法，检测患者血清屮抗HCMVIgG,IgM.我们根据Ncjatollahi等［4］以及KyteDoolittle亲水性方案预测B细胞表位结果，设计合成了含有HCMVgp55上的VTSGSTKD（aa798to805）抗原表位的八分支肽和线性肽，并用质控

7、血清对肽的活性进行了初步鉴定.1材料和方法1.1材料制备型HPLC（Beckman公司）；C18反相色谱柱（25mmxlOOmm,15pm）（Waters公司人核酸蛋白检测仪（丄海嘉鹏科技有限公司）；激光解析质谱（HEWLETTPACKARD公司）；台式冻干机（军事医学科学院四环仪器厂）；固相萃取小柱（Waters公司）；茹甲氧拨基（Fmoc）保护的氨基酸（Merck公司）；1氧3双二甲胺拨基苯骈三氮卩坐四氟化硼盐（TBTU）、1轻基苯并三氮卩坐（HOBT）（ABI公司）;线性多聚赖氨酸、DIEA

8、、三氟乙酸（TFA）（Sigma公司）；G10,G25凝胶（Pharmacia公司）；乙睛（Fisher公司）；ELISA微孔板、小牛血清白蛋白（BSA）、羊抗人酶标抗体、邻苯二胺（OPD）（华美公司）；ELISA包被缓冲液为0.05mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.6）;洗涤液为含有0.5mL/LTween20的0.02mol/L的PBS（pH7.4）；稀释液为含50mL/L小牛血清的PBST20.HCMV质控血清为第四军医大学全军基因诊断技术研究所提供.1.2方法1.2.1线性肽