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1、外周血循环肿瘤细胞检测技术主要内容循环肿瘤细胞检测的意义循环肿瘤细胞检测的基本原理纳米材料技术在循环肿瘤细胞检测中的应用微流控技术在循环肿瘤细胞检测中的应用循环肿瘤细胞（circulatingtumorcells,CTCs）1896年Ashworth在患者外周血中发现与原发肿瘤细胞体积和形态相似的细胞；目前CTCs定义为自发或因诊疗操作脱离实体瘤原发灶或转移灶进入外周血循环的一类肿瘤细胞。AshworthTR.AustMedJ,1869,14:146-147AllardWJ,MateraJ,MillerMC,etal.ClinCancerRe
2、s,2004,10:6897-6904研究CTCs的临床意义TNM分期的重要补充疗效监测和预后判断个体化治疗的指导转移复发的早期预警血循环转移的机制TNM分期的重要补充基于解剖学特点的TNM分期存在许多不足CTCs可以做为TNM分期的重要补充2007年CTCs被ASCO推荐做为肿瘤标志物PantelK,etal.NatRevCancer.2008.8(5):329-40HarrisL,etal.JClinOncol.2007.25(33):5287-312CTCs的临床意义疗效监测和预后判断CTCs可以直接提示癌症患者对治疗的反应持续升高的C
3、TCs提示肿瘤对治疗反应差恶性肿瘤患者CTCs的出现均提示预后不良治疗后CTCs出现与患者复发相关IgnatiadisM,etal.JClinOncol.2007.25(33):5194-202LiuMC,etal.JClinOncol.2009.27(31):5153-9RackBK,etal.JClinOncol.2010.28(15):1003HayesDF,etal.ClinCancerRes.2006.12(14Pt1):4218-24CristofanilliM,etal.NEnglJMed.2004.351(8):781-91C
4、TCs的临床意义个体化治疗的指导个体化治疗方案的制定根据病灶的生物学特性转移灶的生物学特点与原发灶细胞存在差异针对CTCs的分析有助于为临床治疗提供个体化信息StoeckleinNH,etal.IntJCancer.2010.126(3):589-98Alix-PanabieresC,etal.ClinChem.2013.59(1):110-8Alix-PanabieresC,etal.AnnuRevMed.2012.63:199-215CTCs的临床意义转移复发的早期预警肿瘤转移是肿瘤发生发展的终末期，也是肿瘤病人死亡的主要原因目前常规检测
5、肿瘤转移的方法主要影像学方法肿瘤转移的早期发生在细胞水平即便高分辨率的影像学方法也无法侦测CTCs检测可为潜在的转移提供线索，为早期针对性治疗提供可能CristofanilliM,etal.JAMA.2010.303(11):1092-3BuddGT,etal.ClinCancerRes.2006.12(21):6403-9CTCs的临床意义血循环转移的机制CTCs形成是血循环转移的必经步骤具有何种生物学特性的细胞容易转移ChafferCL,etal.Science.2011.331(6024):1559-64PantelK,etal.Tre
6、ndsMolMed.2010.16(9):398-406CTCs的临床意义CTCs特点外周血含量低：1～10个CTC/mL血液﹠1个CTC/109个血细胞；CTCs特性、形态及细胞标志随着内环境改变而改变，无统一鉴定标准。CTC的检测步骤检测富集以特异性抗体经抗原抗体吸附筛选根据细胞大小进行富集免疫细胞化学结合纳米材料物理学免疫学免疫/化学CTC富集方法免疫磁性分离阳性选择法MACS、Cellsearch系统以及CTC-Chip阴性排除法CD45磁珠去除白细胞（IMB法）抗原抗体吸附筛选光镜下(放大倍数400倍)免疫磁珠吸附目标细胞分子生物学
7、方法(PCR)CTC检测免疫细胞化学方法(ICC、EPISPOT)流式细胞技术CellSearchTM（免疫磁珠技术）采用与细微铁颗粒结合的抗体(铁液)。铁液特异性结合循肿瘤细胞，其强大的磁场把循环肿瘤细胞“牵引”出血样，再用染色鉴定。CellTracks®AutoPrep®SystemCellSearch检测CTCs流程图1、不同肿瘤表面抗体的表达量存在差异2、肿瘤发展过程中细胞的去上皮化CTC研究现状磁珠体积很小，不损伤细胞、不影响细胞功能、不影响细胞的特异染色(细胞膜，细胞质，细胞核)，显微镜下可直接观察或计算机计数。前期应用微米磁珠，
8、比表面积小、尺寸大、稳定性差、易聚沉，致细胞分离效率低，难洗脱并保持细胞活性；检测成本高、样品用量多、样品检测时间长、检测过程封闭等诸多不足．纳米技术增大比表面积，
