生物化学 教学课件 作者 刘群良 主编第十八章.ppt

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1、第十八章重组DNA技术第一节重组DNA技术的重要工具酶一、限制性核酸内切酶二、其他重要工具酶一、限制性核酸内切酶1.限制酶的分类2.限制酶的命名3.限制酶的识别位点1.限制酶的分类2.限制酶的命名3.限制酶的识别位点3.限制酶的识别位点二、其他重要工具酶第二节重组DNA技术常用的载体一、载体的分类二、常用的载体一、载体的分类二、常用的载体1.pMD18-T质粒载体2.pCMV-Myc质粒载体3.λ噬菌体1.pMD18-T质粒载体2.pCMV-Myc质粒载体3.λ噬菌体3.λ噬菌体第三节重组DNA

2、技术常用的基本原理一、目的基因的获取二、目的DNA与载体的连接三、重组DNA导入宿主细胞四、重组DNA的筛选与鉴定五、重组DNA在宿主细胞中的表达和调控一、目的基因的获取1.化学合成2.基因组DNA文库3.cDNA文库4.聚合酶链反应1.化学合成2.基因组DNA文库图18-5建立基因组DNA文库的基本过程3.cDNA文库4.聚合酶链反应图18-6建立cDNA文库的基本过程二、目的DNA与载体的连接㈠粘性末端连接㈡平头末端连接㈢同源多聚尾连接㈣人工接头法㈠粘性末端连接图18-8同一限制酶切割位点连

3、接图18-9不同限制酶切割位点连接㈡平头末端连接㈢同源多聚尾连接图18-10同源多聚尾连接㈣人工接头法三、重组DNA导入宿主细胞四、重组DNA的筛选与鉴定㈠直接选择法㈡限制酶切鉴定㈢PCR筛选重组体㈣菌落原位杂交㈠直接选择法图18-13α-互补筛选㈡限制酶切鉴定㈢PCR筛选重组体㈣菌落原位杂交五、重组DNA在宿主细胞中的表达和调控㈠重组DNA在原核细胞中的表达㈡重组DNA在真核细胞中的表达㈠重组DNA在原核细胞中的表达㈡重组DNA在真核细胞中的表达第四节重组DNA技术在医学和制药工业中的应用1.

4、生产蛋白质类药物2.疫苗生产3.基因治疗1.生产蛋白质类药物2.疫苗生产3.基因治疗