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1、刺激试验刺激是不涉及免疫学机制的一次、多次或持续与试验材料接触所引起的局部炎症反应。皮肤刺激试验评价材料在试验条件下产生皮肤刺激反应的潜在性。家兔为首选，预期无反应，可直接使用3家兔。试验材料与仪器天平精度0.01或0.1g供试品称量用精度0.1或1mg试剂称量用精度50g试验用兔称量用兔固定装置、手术剪刀、推子、游标卡尺、称量瓶、吸管、移液管、包扎带、医用纱布、烧杯、压力蒸汽灭菌器。试剂与器具灭菌试剂75%(V/V)乙醇、0.9％氯化钠注射液或其它规定的浸提介质。器具灭菌与供试品接触的所有器具应采用可靠的方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃恒温20分
2、钟，或置电热干燥箱内160℃干烤2h。试验动物应使用清洁级健康、初成年的、未使用过的试验用（新西兰）兔，雌雄兼用,同一品系,同一饲养条件，体重应不低于2kg。试验用兔的抓取固定方法试验用兔比较驯服不会咬人，但脚爪较尖应避免兔抓伤。进行刺激试验时，只需将兔抓牢或按住即可，抓兔的方法是用右手把两耳轻轻地拿在手心，抓住颈后部的皮厚处，提取兔，然后用左手托住臀部，使兔的体重大部分落在左手上，不能单提两耳、捉拿四肢、提抓腰部和背部。预试验试验材料应使用1只动物进行初试。如动物出现清晰红斑或水肿时，不必再进行其他试验。如试验动物没有出现清晰的红斑或水肿反应时,应至
3、少再选用2只动物进行试验。试验步骤动物准备试验前一天,将试验用兔人工固定或固定到固定装置上，然后把背部脊柱两侧的被毛用手术剪粗剪后再用推子小心的把被毛去除干净(约10cm×15cm区域),作为试验和观察部位。去毛过程应确保动物皮肤健康无损伤。试验方法试验前用75％的(V/V)乙醇擦拭背部去毛区域，等变干后根据供试品的不同性状选用不同的方法进行操作。粉剂或液体样品取0.5g或0.5mL的试验材料，直接涂抹到剃毛皮肤部位。粉剂使用前用少量的水制成糊状，有利于涂抹。用25mm×25mm透气性好的敷料敷贴涂抹样品的皮肤部位,然后敷料外层用纱布包裹，再用半封闭性
4、包扎带固定敷料和纱布4h以上。接触期结束后依次取下包扎带、纱布及敷料,对接触部位进行标记,用温水清洗并擦干。固体样品研成粉末，试验材料可用水充分湿化以保证与皮肤良好的接触性。用25mm×25mm的透气性好的敷料块覆盖材料接触部位,然后敷料外层用纱布包裹，再用半封闭性包扎带固定敷料和纱布4h以上，依次取下包扎带、纱布及敷料,对接触部位进行标记,用温水清洗并擦干。药包材：铝质软胶管：取试样5支，向每支加入标示容量的0.9％氯化钠注射液，振荡5分钟后，合并提取液备用。一般材料：取平整部位表面积600cm2剪碎，加入氯化钠注射液100mL，70℃放置24小时后
5、取出冷却备用。0.9％氯化钠注射液及其浸提液将浸提液滴到25mm×25mm的4层纱布块上(每块约0.5mL),按下图所示部位敷贴于动物背部两侧。将滴有0.9％氯化钠注射液的纱布块敷贴在对照接触部位。然后敷料外层用纱布包裹，再用半封闭性包扎带固定敷料和纱布4h以上，依次取下包扎带、纱布及敷料,对接触部位进行标记,用温水清洗并擦干。去毛的背部区域对照部位供试品部位供试品部位对照部位头部尾部结果观察在除去敷贴物后1h、24h、48h和72h记录各接触部位情况。如存在持久性损伤有必要延长观察时间,以评价这种损伤的可逆性或不可逆性,但延长期不必超过14d。按下表
6、规定的分类系统,描述每一接触部位在每一规定时间内皮肤红斑和水肿反应情况并评分,记录结果以出具试验报告。反 应记分红斑和焦痂形成无红斑极轻微红斑(勉强可见)红斑清晰中度红斑重度红斑(紫红色)至焦痂形成水肿形成无水肿极轻微水肿(勉强可见)水肿清晰(肿起,不超出区域边缘)中度水肿(肿起约1mm)重度水肿(肿起超过1mm,并超出接触区)0123401234刺激最高记分8注:记录并报告皮肤部位的其他异常情况。表14观察损伤情况及评分标准反应类型平均记分极轻微轻度中度重度0.0～0.40.5～1.92.0～4.95.0～8.0表15皮肤刺激试验结果评价结果评价按
7、下列规定确定原发性刺激指数(PII)。将每只动物在每一规定时间试验材料引起的红斑与水肿的原发性刺激记分相加后再除以观察总数(总数为6:2个计分类型和3个观察期)。当用0.9％氯化钠注射液对照时，计算出对照原发性刺激记分，将试验材料原发性刺激记分减去该记分，即得出每只动物原发性刺激记分。使用24h、48h和72h的观察数据进行计算。试验之前或72h后的恢复观察数据不用于计算。每只动物的记分相加后除以动物总数即为原发性刺激指数。皮内刺激试验简述评价材料通过皮内注射浸提液产生刺激反应的潜在性。应排除的试验材料任何对皮肤、眼、粘膜组织有刺激的材料或产品,如具有
8、腐蚀性的强酸或强碱材料(pH≤2或≥11.5)不应再进行本试验。试验材料与仪器天平精度0.01
