紫外可见分光光度法测定维生素B.doc

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1、上海大学生命科学实验中心实验报告课程：生化分析实验姓名：吴梦楠日期：2011.09.21学号：09123364同组者：指导老师：戴小峰实验时间：2011.09.19温度：湿度：实验名称：紫外可见分光光度法测定维生素B2实验目的：1、维生素B2的紫外可见光谱图的测绘2、根据E1%1CM444nm文献值323求取样品中VB2的含量3、用标准曲线法求取样品中VB2的含量4、比较两种方法的误差来源实验原理：维生素B2，通常指核黄素。维生素B2在224、267、375、444nm处具有吸收峰。一般取444nm的波峰为定量吸收峰，除了用一般的工作曲线法外，还可按C17H20N4O6的吸收系

2、数（E1%1CM444nm）为323计算，求取样品中维生素B2的含量。实验器材：Cary100UV-Vis分光光度计、冰醋酸（AR）、氢氧化钠1mol/L（AR）、维生素B2标准试剂（0.3mg/ml）、药片（含维生素B2片）。实验步骤：1、取待测片剂20片，精密称定、研细，精密称取适量（约相当于维生素B210mg），置于1000ml容量瓶中，加冰醋酸5ml与水100ml，置水浴（100℃）加热1小时，时时摇振，使维生素B2溶解，加水稀释，冷却后加氢氧化钠液（1mol/L）30ml。用水稀释至刻度，摇匀，过滤；弃去初滤液，取续滤液，在444nm波长处测定吸收度，C17H20N4

3、O6的吸收系数（E1%1CM444nm）为323计算。2、用移液管分别吸取2ml、4ml、5ml、6ml、8ml维生素B2标准试剂（0.3mg/ml）于5个100ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。用紫外分光光度计分别测量5个容量瓶中的VB2稀释液，得到5个吸收度数值A444nm。以VB2稀释液浓度为横坐标，A444nm数值为纵坐标，建立VB2浓度与吸收度的标准曲线，然后测出待测液的吸收度数值，在标准曲线上找到相应的浓度数值即可。实验结果：1、维生素B2的紫外可见光谱扫描图2、维生素B2标准工作曲线图标准液体积（ml）024568待测液标准液浓度（μg/ml）061215182

4、4A444nm00.1890.3730.4870.5610.7550.322根据工作曲线，计算得：待测液浓度为10.222μg/ml思考题：1、本方法要求在避光下进行，试述理由。答：本方法测定的是物质在特定波长下光的吸收，避免VB2遇光分解干扰数据测定。2、当吸收值为何值时，浓度测量的相对误差最小。答：当吸光值为0.2——0.8之间，相对误差最小。2、如何选择参比溶液？基本原则是什么？答：当试剂与显色液为无色，选择水，当试剂有色，显色液无色，选择不如显色液的被测液，当显色剂有色时，可选择不加试样溶液的试剂。原则是消除本身物质以外的影响因素。4、比较两种定量方法，探求误差原因。答

5、：标准曲线：每次的色谱条件难以完全相同，有误差。文献曲线：因操作、环境、仪器、人员与文献值不同，引起误差。5、本实验中一般选取445nm左右的波峰为维生素B2的定量吸收峰，为什么？答：可减少其他物质的干扰，且波峰较宽有利于检测。