生物实验常用溶液的配制(整理版).doc

《生物实验常用溶液的配制(整理版).doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、生物实验常用溶液的配制一、DNA电泳相关：1、DNA电泳缓冲液：（1）Tris-乙酸（TAE）缓冲液：TAE较为常用，且价格低，但其缓冲能力较弱。所以TAE电泳需要蠕动泵使两极贮液槽进行液体循环，而且TAE需要经常更新；且要加入EDTA，目的在于鳌合二价离子，抑制DNase，以保护DNA。①TAE使用液：1×：40mmol/LTris-乙酸1mmol/LEDTA②TAE贮存液（每L）：50×：242gTris碱57.1ml冰乙酸100ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）（2）Tris-硼酸（TBE）缓冲液：①TBE使用液：0.5×：0.045mol/LTris-硼酸1

2、mmol/LEDTA②TBE贮存液（每L）：5×：54gTris碱27.5ml硼酸20ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）（3）Tris-磷酸（TPE）缓冲液：①TPE使用液：1×：90mmol/LTris-磷酸2mmol/LEDTA②TPE贮存液（每L）：10×：108gTris碱15.5ml85%磷酸40ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）2、1%（线性DNA分子大小为400-6000）琼脂糖凝胶DNA电泳操作过程：①制胶：按要求取1g琼脂糖加入1×TAE（或0.5×TAE）电泳缓冲液100ml，置于三角瓶中，在沸水浴或微波炉中加热至琼脂糖溶解（一般中低火温

3、，3-5min即可）；②溶液冷却至60℃，加入EB至0.5μg/ml（2-3ml即可）,充分混匀；③迅速倒入备好的胶模中；④凝胶完全凝固后，小心移去梳子和封口胶带，将凝胶放入电泳槽中；⑤加入能没过胶面1mm深的电泳缓冲液（TAE）；⑥DNA样品与加样缓冲液（溴酚蓝）混合后，用微量移液吸头加样；⑦盖上电泳槽并通电，使DNA向正极移动（黑极→红极），1-5V/cm（80V电压左右）进行电泳（30min左右）；⑧电泳完毕，切断电源，取出凝胶于紫外投射光源下观察并拍照。二、12％SDS-PAGE的相关溶液1、5×加样缓冲液：10%w/vSDS，10mMDTT或β-巯基乙醇，20%v

4、/v甘油，0.2MTris-HClpH6.8，0.05%w/v溴酚蓝。（注意：将不含DTT的1×SDS凝胶上样缓冲液置于室温下储存，临用前从1mol/LDTT储液中添加到上述缓冲液中。）5×SampleBuffer：10%w/vSDS10mmol/LDithiothreitol,orbeta-mercapto-ethanol20%v/vGlycerol0.2mol/LTris-HClpH6.80.05%w/vBromophenolblue另：2×SDS上样液缓冲液:100mL溶液中含0.5mol/LTris-HCl(pH=6.8)20mL,SDS4g,甘油20mL,溴酚蓝0

5、.2g,DTT3g;2、1×电泳缓冲液：25mMTris-HClpH8.8，200mM甘氨酸，0.1%w/vSDS。1×RunningBuffer25mmol/LTris-HClpH8.8200～250mmol/LGlycine（电泳级）（pH8.3）0.1%w/vSDS可以配成5×贮存液，在900ml去离子水中溶解15.1gTris碱和94g甘氨酸，然后加入50ml10%（m/v）电泳级SDS的贮存液，用去离子水补至1000ml即可。3、分离胶配方：H2O10.5，1.5MTris-HClpH8.87.5，20%w/vSDS0.15，30%丙烯酰胺/0.8%亚甲双丙烯酰胺

6、(/w/v)12.0，10%w/v过硫酸铵15，TEMED0.02（单位：mL，总体积25mL）。注：过硫酸铵会缓慢分解，故应每周新鲜配制，可用去离子水配制少量10%（m/v）储存液于4℃保存。RunningGelSolution(mL)：H2O10.21.5mol/LTris-HClpH8.87.520%SDS(w/v)0.15Acrylamide/Bis-acrylamide(30%/0.8%w/v)12.010%ammoniumpersulfate(w/v)0.15TEMED0.024、积层胶配方(4%丙烯酰胺)：H2O3.05，0.5MTris-HClpH6.81.

7、25，20%w/vSDS0.025，30%丙烯酰胺/0.8%亚甲双丙烯酰胺(/w/v)0.65，10%w/v过硫酸铵0.025，TEMED0.005（单位：mL，总体积5mL）。StackingGelSolution(4%Acrylamide)(mL)：H2O3.0750.5mol/LTris-HClpH6.81.2520%SDS(w/v)0.025Acrylamide/Bis-acrylamide(30%/0.8%w/v)0.6710%ammoniumpersulfate(w/v)0.025TEMED0.0055