实验室常用溶液的配制

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1、实验室常用溶液的配制1．30%丙烯酰胺溶液（100ml）【配制方法】将29g丙烯酰胺和1gN,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的蒸馏水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于4℃温度。【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混

2、合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸，因此大于1年的溶液应该被丢弃。2．40%丙烯酰胺（用于DNA测序，1L）【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20gN,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。置棕色瓶中保存于室温。【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。3．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液（1ml）【配制方法

3、】在0.8ml蒸馏水中溶解60mgATP，用0.1mol/LNaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水稀释1ml【注意】分装成小份保存于-70℃4．10mol/L乙酸铵溶液（1L）【配制方法】把770g乙酸铵溶解于800ml蒸馏水中，加水稀释至1L后过滤除菌。在4°C储存。【注意】乙酸铵是热不稳定的。不要高压灭菌。5．10%过硫酸铵溶液（10ml）【配制方法】把1g过硫酸铵溶于8ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至10ml。该溶液可在4℃保存数周。6．1mol/LCaCl2溶液（200ml）【配制方法】称取54gCaCl2·6H2O并溶解在170ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至200ml。用0.

4、22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。【用法】制备感受态细胞时，将等分试样解冻，用蒸馏水稀释至100ml。通过Nalgene过滤器（0.45微米）过滤除菌，并在使用前冷却至0℃。7．2.5mol/LCaCl2溶液（20ml）【配制方法】称取13.5gCaCl2·6H2O并溶于15ml蒸馏水中，用蒸馏水补足体积至20ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。8．脱氧核苷三磷酸（dNTPs）溶液【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/lTris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用

5、pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度。碱基波长消光系数（ε）（M-1·cm-1）A2591.54×104G2531.37×104C2719.10×103T2607.40×103计算每个dNTP的实际浓度。对于路径长度为1cm的比色皿，吸光度等于消光系数和摩尔浓度的乘积。然后用蒸馏水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分别分装成小份贮存于-70℃。9．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液（20ml）【配制方法】称取3.09gDTT，溶于15ml蒸馏水中，用0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）补足体积

6、至20ml。通过0.22微米过滤器过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。【注意】不要对DTT或含有DTT的溶液进行高压灭菌。10．0.5mol/lEDTA(pH8.0)溶液（1L）【配制方法】在800ml蒸馏水中加入186.1gNa2EDTA·2H2O，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20gNaOH颗粒），然后稀释至1L，分装后高压灭菌备用。在室温下保存。【注意】EDTA二钠盐不溶于水，需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。分配适当的等分试样并通过高压灭菌消毒。11．溴化乙锭（10mg/ml溶液）（100ml）【配制方法】在100

7、ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于4°C。【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。使用后，这些溶液应进行净化。有关如何执行此操作的详细信息，请参阅机构指南。12．2×HEPES缓冲盐溶液（100ml）【配制方法】用90ml的蒸馏水溶解1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2PO4·2H2O、0.2g葡