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时间:2019-03-17
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1、生化实验常用溶液的配制一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine):溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。10mol/L乙酸胺(ammoniumacetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试
2、剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾(potassiumacetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到10
3、0ml。1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠(sodiumacetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。0.5mol/LEDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。1mol/LHEPES:将23.8gHEPES溶于约9
4、0ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。1mol/LHCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/mlIPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。100mmol/LPMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。20
5、mg/ml蛋白酶K(proteinaseK):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-freeRNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)5mol/L氯化钠(
6、NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml
7、水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)14/142.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。100×Denhardt试剂(Denhardt'sregent)100×Denhardt试剂(Denhardt'sregent)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖(Ficoll,400型)2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)2%BSA(组分V)水2g2g2g加水
8、至总体积为100ml依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。10×标准DNA连接酶缓冲液(standardDNAligasebuffer)(粘端、平端连接)成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/LTris-HCl100mmol/LMgCl2100mmol/LDTT2mmol/LATP5mmol/L盐酸亚精胺(可选)0.5mg/mlBSA(组分V)(可选)水5ml1mol/L贮液1ml1mol/L贮液1ml1mol/L贮液200ul100mmol
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