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1、甲基红（MR）试验/VP试验.原理细菌分解培养基中的葡萄糖产酸，当产酸量大，使培养基的pH降至4。5以下时，加入甲基红指示剂而变红E甲基红的变色范围为pH4.4（红色）〜pH6.2（黄色）），此为甲基红试验。当细菌发酵葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再变为乙酰T基T醇；乙酰屮基T醇又变成2,3—丁二烯醇，2,3—丁二烯醇在碱性条件下氧化成为二乙酰，二乙酰和蛋白胨屮精氨酸胍基起作用产生粉红色的化合物，此为VP试验。这W个试验密切和关，对一种细茼而言，W者只能居其一.培养基及试剂葡萄糖蛋白胨水溶液。甲基红试剂：
2、甲基红0.02g,95%洒精60mL，蒸馏水40ral。VP试剂：甲液、：a—萘酚酒精溶液（o—萘酚5g，无水乙醇100mL）。乙液：KOH溶液（KOH40g,水100mL）o将甲液和乙液分别装于棕色瓶中，于4〜10C保存。或：硫酸铜lg,浓氨水40mL,10%KOH950mL,蒸馏水lOmLoMR试验方法取一种细菌的24h培养物，接种于葡萄糖蛋白胨水培养基屮，置37C培养48〜72h,取出后加TT基红试剂3〜5滴，凡培养液呈红色者为阳性，以“十”表示；橙色者为可疑，以“±”表示；黄色者为阴性，以“
3、一”表示。VP试验方法取一利
4、细菌的*24h纯培养物，接种于葡萄糖蛋白胨水培养基屮，置37’C培养48〜72ho取出后在培养液中先加VP试剂甲液0.6mL,再加乙液0.2mL,充分混匀。静置在试管架上，15min后培养液呈红色者为阳性，以“+”表示；不变色为阴性，以“一”表示。lh后可出现假阳性。或者可以用等量的硫酸铜试剂于培养液中混合，静置，强阳性者约5minJiS就可产生粉红色反应。硫化氨试验原理细菌分解含硫氨基酸，产生HS，与培养基屮的醋酸铅或FeS04发生反应，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁。培
5、养基可用成品微暈发酵管、醋酸铅琼脂或三糖铁琼脂斜面。微量法取一种细菌纯培养物，接种于H2S微量发酵管中，置37°C培养24h后观察结果。培养液呈黑色者为阳性，以“+”表示，无色者为阴性，以“一”表示。常量法用接种针蘸取纯培养物，沿试管壁作穿刺醋酸铅琼脂或三糖铁培养基，37°C培养24—48h或更时间，培养基变黑者为阳性。或将纯培养物接种于肉汤，肝浸汤琼脂斜面或血清葡萄糖琼脂斜面，在试管壁和棉花塞间夹一6.5cmX0.6cra大小的试纸条（浸冇饱和醋酸铅溶液*）,培养于37'C,观察纸条变黑者为阳性。
6、氧化型与发酵型（0/F）的测定原理不同细菌对不同的糖分解能力及代谢产物不同，这种能力因是否有氧气的存在而异，有氧条件下称为氧化，无氧条件下称为发酵。这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员屮尤其有意义。培养基蛋白胨2g,氯化钠5g，磷酸氢二钾0.3g,葡萄糖10g,琼脂3g，1%溴麝香草酚蓝3mL,蒸馏水lOOOmLo将蛋白胨、盐、琼脂和水浞合，加热溶解，校tpH至7.2,然后加葡萄糖和指示剂，加热溶解；分装试管，3〜4mL僧；115’C,高压蒸汽灭菌20min，取岀后冷却成琼脂柱。试验方法挑取18〜
7、24h的幼龄斜而培养物，穿刺接种，每种细菌接种两管，于其屮1管覆盖ImL灭菌的液体石蜡，37C培养48h或更K时问，最1<:可达7d。结果判定只在没旮覆盖石蜡的一管发酵糖产酸或产酸产气者属铽化型；两管均发酵糖产酸或产酸产气者为发酵型；两管都不生长者不予判定结果。糖类分解试验原理细尚分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切和关，是受遗传基因所决定的，是细菌的重要表型特征，奋助于鉴定细菌，含糖培养基屮加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或苒他碳水化合
8、物。培养基可用市售各种糖或醇类的微量发酵管。试验方法取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、卄露醇、蔗糖培养基内，开口朝下，置灭茼培养皿中。37C培养24h,观察结果并记录。如果接种进去的细茼可发酵某种糖或醇，则可产酸，使培奍基由紫色变成黄色（培养基内指示剂溴甲酚紫由pH7,0（紫色）-pH5.4（黄色>），如果不发酵，则仍保持紫色。如发酵的同吋又产生气体，则在微量发酵管顶部积宥气泡。结果判定.用符号表示无变化-培养液仍为紫色产酸.培养液变为黄色产酸又产气©培养液变黄，并有气泡口
9、引口朵（錠基质）试验原理有些细菌（如大肠杆菌）能分解蛋白质屮的色氨酸产生吲哚，吲哚与对二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而成红色。语养基Dunham氏蛋白胨水溶液。蛋白胨lg，氯化钠0。5g，蒸馈水100mL。将蛋0胨与氯化钠加入蒸馏水中，加热溶解后调pH为7.6,再煮沸加热30min。待冷后用滤纸过滤，分裝，121°C高压蒸汽灭菌15min。Ehrlich氏试剂对位二氣基苯甲酸lg，无水乙醇95mL，浓盐酸20mL。先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。Kovac氏试剂对
