形态观察方法.ppt

《形态观察方法.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第三章细胞生物学研究方法进行初步观察形成可验证的假说设计对照试验收集资料解释结果作出合理结论查阅已有知识生物学研究模式生物第三章细胞生物学研究方法细胞形态结构的观察方法光学显微镜技术电子显微镜技术扫描遂道显微镜细胞组分的分析方法细胞培养、细胞工程与显微操作技术一、光学显微镜技术lightmicroscopy普通复式光学显微镜技术荧光显微镜技术p53激光共焦扫描显微镜技术p53相差显微镜p51微分干涉显微镜p51录像增差显微镜技术倒置显微镜暗视野显微镜显微镜发展趋势重要的光学技术参数光镜样本制作采用组合方式，集普通光镜加相差、

2、荧光、暗视野DIC、摄影装置于一体。自动化与电子化。电子显微镜的基本知识主要电镜制样技术扫描电镜二、电子显微镜技术electronmicroscopy电镜与光镜的比较电镜与光镜光路图比较电子显微镜的基本构造1940年，英国剑桥大学首先试制成功扫描电子显微镜。直到1965年，才有英国剑桥科学仪器有限公司生产出实用性强的商品扫描电镜。由于扫描电镜具有显著的优点，广泛应用于生物学、医学、古生物学、地质学、化学、物理学、电子学以及勘察、冶金，机械与轻工业等领域，成为十分有用的研究工具。三、扫描遂道显微镜（scanningtunne

3、lingmicroscope，STM）原理：量子力学中的隧道效应，原子间作用力、磁力、摩擦力等装置：扫描的压电陶瓷，逼近装置，电子学反馈控制系统和数据采集、处理、显示系统。特点：1、可对晶体或非晶体成像，无需复杂计算，分辨本领高（侧分辨率为0.1～0.2nm，纵分辨率可达0.001nm）2、可在真空、大气、液体等多种条件下进行非破坏性测量3、可实时得到样品表面三维图象，可测量厚度信息4、可连续成像，进行动态观察用途：纳米生物学研究领域中的重要工具荧光显微镜技术（FluorescenceMicroscopy）原理与应用

4、直接荧光标记技术间接免疫荧光标记技术在光镜水平用于观察能激发出荧光的结构。免疫荧光观察、疾病诊断、特异蛋白质等生物大分子的定性定位：如绿色荧光蛋白(GFP)的应用激光共焦扫描显微镜技术（LaserConfocalMicroscopy）原理应用：用激光作光源，排除焦平面以外光的干扰，逐点、逐行、逐面快速扫描，增强图像反差。能显示细胞样品的立体结构。分辨力是普通光学显微镜的3倍。用途类似荧光显微镜，能扫描不同层次，形成立体图像。微分干涉显微镜（differential-interferencemicroscope）偏

5、振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究活细胞中较大的细胞器录像增差显微镜技术（video-enhancemicroscopy）计算机辅助的微分干涉显微镜可在高分辨率下研究活细胞中的颗粒及细胞器的运动p51电子显微镜与光学显微镜的基本区别光镜与电镜的主要区别（1）光源不同光镜为可见光或紫外线；电镜为电子束（2）透镜不同光镜为玻璃；电镜为电磁透镜（3）真空（4）显示记录系统电镜与光镜光路图比较终像（眼或底片）目镜投影镜物镜样品聚光镜荧光屏成像中间像电子显微镜的基本构造主要电镜

6、制样技术超薄切片技术用于电镜观察的样本制备示意图负染色技术（Negativestaining）重金属盐对铺展在载网上样品染色，干燥后衬托出样品的精细结构金属投影冰冻蚀刻技术（Freezeetching）（技术示意图）冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒和膜表面结构。快速冷冻深度蚀刻技术（quickfreezedeepetching）电镜三维重构技术整装细胞电镜技术是观察细胞骨架的处理技术。扫描电镜（Scanningelectronmicroscope，SEM）原理与应用：电子“探针”扫描，激发

7、样品表面放出二次电子，探测器收集二次电子成象。特点：引起样品变形的表面张力问题---CO2临界点干燥法核酸大分子制样技术电镜显微放射自显影电镜整装细胞制片技术p63石蜡切片技术取材－固定－脱水－包埋－切片－脱蜡－复水－染色－脱水－透明－封片－观察步骤：☆基本构造：光学放大系统、照明系统、机械和支架系统☆光学显微镜成像原理激发样本荧光保护眼睛特点：1、光源为紫外线，波长较短，分辨力高于普通显微镜；2、有两个特殊的滤光片；照明方式常为落射式。①天然物质经紫外线照射后发荧光的物质，如叶绿素能发出血红色荧光。激光作扫描光源

8、扫描焦平面上样品，得样品切面像载物台上微量步进马达使载物台上下移动,改变焦平面得不同层次的切面图像计算机图像三维重组获样品立体图像"显微CT"细胞内的各结构可因密度不同而产生相位差(即光程差)，不过人眼无法鉴别这种微小的变化。相差显微镜能够把透过标本的可见光的光程差或相位差，变成振幅差，提