《细胞形态结构观察》PPT课件

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1、第三章细胞形态结构观察技术一、活体细胞的观察和摄影技术1.倒置显微镜：P60图3-3（提问光镜使用注意）适用：观察贴壁生长的培养中细胞构造特点：因物镜置于观察标本下方而得名技巧：调弱光亮度，集光器稍远些，增大光线反差，对正光轴；摄影时，使观察物稍偏远离焦点，照片会更清晰。底片选用正片，反差大2.相差显微镜P62图3-4适用：可增强活细胞同背底反差，帮助看清细胞的轮廓和细胞内细微结构，如：核仁、染色质、线粒体等。构造特点：有两个附加构件：相差接物镜：其光学系统中有一个光环透镜相差聚光器：内有数个相位板，使用时与物镜倍数一致技巧：细胞培养瓶质地均匀透明较好，最好用塑料瓶

2、；观察摄影时，瓶壁要擦净；光轴对正，照明度适宜，摸索试调至最佳3.荧光显微镜P67图3-6适用：观察细胞内天然的荧光物质，如维生素、脂褐素、核黄素等，也可观察可与荧光染料结合的细胞组分。构造特点：与普通光镜比，区别在于用高压汞灯光源，波长可激发荧光物质产生荧光；滤光片不同。技巧：观察必须是自发荧光或经荧光染色的标本；选用效果最好的滤光片；荧光标本易褪色，不能长期保存，观察操作要迅速，作好记录；仪器的高压汞灯光源启动后15分钟内不得关闭，关闭后，灯冷却后方可再起动，否则寿命大减，长时间观察标本时，需带护目镜。4.暗视野显微镜P64图3-5适用：观察记录活细胞或细胞器的

3、运动轨迹，提高分辨率构造特点：只有聚光器不同于普通显微镜，设有一个中央遮光板使照明光线不能直射。标本进入目镜，只许标本散射光进入目镜技巧：物镜的数值孔径必小于聚光器的数值孔径；盖玻片，载玻片应清洁无痕；聚光镜和载玻片之间加香柏油，保证效果。二.显微摄影技术p681.概念：显微摄影术是利用显微摄影装置拍摄显微镜视野的物象的技术。2.技术类型：胶片相机摄像数码相机摄像CCD图像采集三者前期操作一致，但成像和图像存储原理不同。3.图像记录原理：胶片相机摄像：显微摄影时，光线自标本片的微小物件射入物镜后，造成一个倒立的放大实像，经目镜进一步放大后，投射在照相底片上，使底片感

4、光而记录下显微镜视野下物象。数码相机摄像：是以数字的形式用电子设备储存图像。拍照后，可通过数据线将所拍摄图像传输到电脑，也可将相机的存储卡取出，通过读卡器将拍摄的图像传输到电脑上。数码相机摄像原理与CCD图像采集器相同。CCD图像传感器：即CCD(chargecopledDevice,感光耦合组件）CCD的组成结构有三个层次：上层：聚光镜片（增光镜片）中层：一个类似马赛克的网络（分色网络）下层：垫在下层的电子线路矩阵（感应线路是可记录光线变化的半导体）CCD工作方式之一：当数码相机的快门开启，来自影像的光线穿过，这些马赛克会让感光点的=氧化硅材料释放出电子（正电）与

5、电洞（负电）。经由外部加入电压，这些电子和电洞会被转移到不同极性的另一个硅区暂存。电子数的多寡和曝光点所接受的光量成正比。在一个影像最明亮部位，可有十万电子被积存起来。CCDIMAGESENSOR外形彩色CCD的组成结构分图CCD的三层结构：上：增光镜片、中：色块网格下：感应线路由微型镜头、马赛克分色网格，及垫于最底层的电子线路矩阵所组成4.拍摄技术步骤：胶片相机拍摄：p69-74(生物教研室李相伟）数码相机拍摄：p74-75(同上）CCD图像采集：（病理教研室姚海涛（实验中心刘君星）5.缩时显微摄影术适用：记录细胞或细胞器连续动态变化过程正常时态连续拍照缩时逐格拍

6、照主要装备：倒置显微镜，16mm摄影机，自控缩时启动拍摄装置。原理：缩时间隔时间：目标物实际活动时间X1/24影片排成后要求放镜时间=3600秒／10秒x1／24=15秒所以，每隔15秒摄取1张照片。三、光镜下的固定细胞观察法（组胚，病理）细胞器培养皿内铺盖片单层培养取盖片细胞悬液离心沉淀涂片固定染色观察拍照（固定剂，染色剂知识介绍）固定剂的作用：穿透，固定，保形，防腐固定剂的选择：P83细胞内组分的差异染色。染色剂的选择：Giemsa—染色体桃红色。本书P84Feulgen—DNA紫红色，细胞质绿色。鄂P141吖啶橙—RNA红色，DNA亮绿色。本书P86苏木精-伊

7、红（HE)—细胞核蓝色，细胞质红色本书P85过碘酸席夫—细胞内含糖原区—紫红色。章P58苏丹红III—细胞内含脂肪区—橘红色。章P59鬼笔环肽—溦丝染色。章P59免疫荧光法—溦管染色。章P60联苯胺+H2O2—过氧化氢体染色。小章P37詹纳斯绿B—活体细胞线粒体。小章P43四、激光扫描共聚焦显微镜技术（实验中心）1.概念和原理P76lasterscanningconfocalmicroscopeLSCM激光共聚焦显微镜是20世纪80年代以来发展起来的一项细胞生物学和高分子材料科学领域的高科技分析仪器。其在传统光学显微镜基础上，利用激光作为光源，经照明针孔可形成点