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《人牙周膜干细胞分离培养及生物学特性探究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、人牙周膜干细胞分离培养及生物学特性探［摘要］目的：分离筛选人牙周膜干细胞，研究其生物学特性并进行初步鉴定。方法：采用STR0-1为标记物以免疫磁珠分离筛选人牙周膜干细胞，观察细胞生长及克隆形成情况，流式细胞仪细胞周期、细胞表型分析，免疫细胞化学染色技术检测STR0-1.Vimentin表达，并测定细胞体外多向分化能力。结果：免疫磁珠法可获得人牙周膜干细胞，细胞具有克隆形成能力，增殖速度低。细胞周期分析大多数细胞处于GO/G1期，为慢周期性；细胞表型分析证实CD146、CD44高表达,CD34、CD45低表达。STRO-1及V
2、imentin均为阳性染色，矿化诱导和成脂诱导证实该细胞具有多向分化能力。结论：免疫磁珠法是有效的分离纯化牙周膜干细胞的方法。所分离细胞具有干细胞的细胞周期、表型特点及多向分化能力。［关键词］干细胞；人牙周膜干细胞；免疫磁珠；流式细胞计量术；免疫细胞化学［中图分类号1R783.5［文献标识码］A［文章编号11008-6455(2008)05-04Isolation,identificationandbionomicsofhumanperiodontal1igamentstemcellsPANFengl,DINGYinl,WA
3、NGGuangl,ZHAOYu2,NIHua2(1.DepartmentofOrthodontics,StomatologyHospital,TheFourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an710032,Shaanxi,China；2.CenterofTissueEngineering,StomatologyHospital,TheFourthMilitaryMedicalUniversity)Abstract：ObjectiveToisolateandidentifytheperiodont
4、alligamentstemcellsanddemonstrateitsbionomics・MethodsPDLSCswereisolatedbyimmunomagneticmethod・TheflowcytometryandimmunocytochemistryprocedurewereusedtodisclosethecellcycleandsurfacemarkerofthePDLSCs.0steoinductionandadipoinductionweredonetoconformthemultidirectiori
5、aldifferentiationofPDLSCs.ResultsTheacquiredcellshadclonalityandlowproliferatiori.MostofthecellswereinphaseGO/G1andtherewerehighexpressionofCD146andCD44onthesecells,meanwhile,CD34andCD45wereoflowexpression.ThecellswereVimentinandSTRO-1positivewhiletheirmultidirecti
6、onaldifferentiationabilitywasconfirmedinvitro.ConclusionimmunomagneticmethodwasaneffectivewaytoisolateandpurifythePDLSCs・Theacquiredcellsshowedthecharacteristicsofstemcells・Keywords：stemcell；humanperiodontalligamentstemcell；immunomagneticbeads；flowcytometry；iimnuno
7、cytochemistry研究证实牙周膜内存在具有横向分化能力的干细胞（牙周膜干细胞），在体外微环境作用下还可分化为成牙骨质细胞或成骨细胞[1-2]o因此，牙周膜干细胞（PDLSCs）作为一种新发现的干细胞，在牙周组织工程研究中有较大的应用前景。但是牙周膜组织量小、分离困难，一直成为制约牙周膜干细胞研究的重要原因。已有的克隆筛选法操作程序繁琐，周期较长[1],因此需要寻找简便、快捷的筛选方法来分离牙周膜干细胞。本研究应用免疫磁珠技术对人牙周膜干细胞进行筛选，并扩增培养，通过对牙周膜干细胞生长曲线、克隆形成率、细胞周期、细胞表
8、面抗原标记物测定及多向分化能力的研究对其生物学特性进行研究，以期建立一种便捷有效的分离方法并明确牙周膜干细胞的生物学特性，为进一步研究牙周损伤的发病机理及临床治疗提供基础。1材料和方法1.1实验材料和设备：a-MEM培养基（Gibco,美国），羊抗小鼠磁珠试剂盒（Dynalbiotech,
