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1、HPLC法测定人血浆中比阿培南浓度及其药动学探究［摘要］目的：建立人血浆中比阿培南的高效液相色谱检测方法。方法：色谱柱为AgilentZORBAXBonus-RP(4.6mmx250mm,5pm);流动相为甲醇和0.03%醋酸水溶液，采用梯度洗脱法；流速为1.00ml/min;检测波长为300nm,血浆样品处理选用&轻基口引唏乙酸为内标，采用硫酸锌沉淀蛋白。结果：比阿培南在0・2~50.0pg/ml范围内线性良好，HPLC测定定量下限为0.2pg/ml上匕阿培南和内标在血浆的保留时间分别为3.9min和9.7min,出峰迅速。比阿培南浓度分别为0.5
2、、5.0和40.0pg/ml,血浆样本回收率分别为101.8%.100.8%,100.4%:精密度试验日内和日间RSD均小于15%，稳定性试验结果表明血浆样品在样品处理过程中较稳定(RSD2.1.5给药方法临床上本品采用的给药方式为静脉滴注，故本试验采用将注射用比阿培南，并用100ml氯化钠注射液稀释，静脉滴注，滴注时间为1.0ho根据说明书,注射用比阿培南的正常临床治疗剂量为静脉滴注，一次300mg,12h一次。故本试验采用低剂量组单次静脉滴注150mg;中剂量组单次静脉滴注300mg,高剂量组单次静脉滴注600mg。多次给药，每次300mg,每日
3、2次。2.1.6样品采集2.1.6.1单次给药受试者于试验前1周和试验期内均勿饮用酒类和咖啡类饮料，并在试验开始前一天进入I期临床试验病房，晚上统一清淡饮食。受试者给药间隔依取血速度而定，通常间隔5mino于给药前Oh、开始给药后15.0、30.0、45.0、60.0min，给药结束后0.5、1.0、1.5、2.0、25、3.0、4.0、6.0h取血；受试者取血顺序同给药顺序。受试者服药后应避免剧烈运动，亦不得长时间卧床。2.1.6.2多次给药中剂量组10名健康受试者在单次给药结束后，继续进行多次给药，给药剂量为300mg/次（药液稀释方法同单次给药
4、），每日2次，连续给药5d,每次静脉滴注时间均为1h（第5天只给药一次b于第2、3、4、5天早给药前及第5天开始给药后15.0.30.0.45.0、60.0min，给药结束后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0h前臂静脉取血，每人4ml,置于肝素试管中，分取血浆,于・209保存待测。受试者服药后应避免剧烈运动，亦不得长时间卧床。多次给药后3d对受试者进行体检复查。2.2实验结果2.2.1方法专属性在本实验所采用的色谱条件下，注射用比阿培南的保留时间为3.9min左右，内标保留时间为9.7min左右。注射用比阿培南和内
5、标峰形良好，无杂峰干扰测定。提示本方法具有较高的特异性，能准确测定血浆中的注射用比阿培南的浓度，灵敏度较高。见图1o2.2.2标准曲线和线性范围>z<取1.5ml塑料离心管数支，量取空白血浆200pl,置于离心管中，分别精密加入不同浓度的的比阿培南标准液，旋涡混匀，配成含比阿培南的浓度分别为0.2,0.5、1.0.3.0、10.0,20.0,50.0pg/ml的标准含药血浆，各血浆含0.1mg/ml内标20pl,按“24.3”项下血浆样品的处理方法操作，制备一条标准曲线，并同时做空白样品，进行HPLC-UV分析。记录色谱图，计算比阿培南的峰面积As和
6、内标峰面积Ai的比值f（f二As/Aib以峰面积比值f对血药浓度C作权重回归计算，得回归方程:f=0.0019+0.1638C（权重系数w=1/C）,r=0.9990，按上述条件测得比阿培南在血浆中的定量下限为0.2pg/mlo2.2.3精密度与准确度取1.5ml塑料离心管数支，按22.2”血浆中比阿培南标准曲线制备方法制备含比阿培南浓度分别为0.5、5.0、40.0pg/ml的标准含药血浆（每个浓度做5份样品）及一条随行标准曲线，按“21.3”项下血浆样品的处理方法操作。每天做一批及一条随行标准曲线，连续做3d,共3批，每批每个浓度做5份样品，记录
7、色谱图，计算比阿培南峰面积As和内标峰面积Ai的比值f,代入当天的标准曲线求得实测浓度，计算批内和批间精密度。见表1。表1血浆中比阿培南的精密度2.2.4加样回收率试验取1.5ml塑料离心管数支，加入空白血浆0.2ml,旋涡混匀，配成含比阿培南的浓度分别为0.5、5.0、40.0pg/ml的标准含药血浆，计算比阿培南加样回收率。见表2。表2比阿培南加样回收率试验（n二5）2.2.5稳定性试验取新鲜配制的比阿培南储备液和49放置4d的比阿培南储备液，以甲醇•水（5:95,V/V）稀释至5pg/ml,各进行3样本分析，采用HPLC法测定。内标（5•轻基n
8、弭朵乙酸）储备液稳定性，方法同上，稀释至10pg/ml,各进行3样本分析,结果表明，比阿培南和内标的标准溶液
