植物组织培养的培养基.doc

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1、★植物组织培养培养基的主要成分1•无机营养物：无机营养物主要rh大量元素和微量元素两部分组成，大量元素主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种，氮源通常有硝态氮或銭态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和馋态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基屮主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、钱的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、猛、锌、钳、铜、钻和铁，这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用，有的对蛋白质或酶的生物活性丁分重要，有的是参与某些生物过程的调节。培养基屮的铁离了，大多以螯合

2、铁的形式存在，即FeSO"与Na2—EDTA（螯合剂）的泯合。2.碳:培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。因此，需要在培养基屮附加一些碳水化合物以供需要。培养基屮的碳水化合物通常是蔗糖或D■匍萄糖，用量通常为2%-4%,高者可达5%,亦可用市信的白糖所代替，但一般应增加用量，而且故好用比较固定的厂家生产的产品，以保证实验的稳定性。3•有机营养成分：包括人T合成或天然的有机附加物（包括维生素，氨基酸及其它有机物质等）。最常用的有酪航水解物（水解乳蛋白、水解酪蛋白CH）、酵母提取物、玉米胚乳、麦芽浸岀物、西红柿汁、椰了汁（CM）及备种氨基酸如甘氨酸（氨基乙酸）等。维生素：在培

3、养基屮加入维生素，常有利于外植体的发疔。培养基屮的维生索属于B族维生索，其屮效果最佳的有硫氨索（维生索B1）、盐酸毗哆醉（维生索B6）和维生素H（生物素）、泛酸钙等、肌醇（环己六醉）、烟酸。在部分培养基屮还添加维生素BX（氨酰苯甲酸）、维生素C（抗坏血酸）、维生素E（生育酚）、、维生素B12（氛钻胺酸）、维生素BC（叶酸）、维生素B2（核黄素）和氯化胆碱等维生素。这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作川，如肌醇丄要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。4•生长调节物质（常称为激索）常用的生长调节物质大致包括以下三类：（1）植物生长素类。主要作用是：诱导愈

4、伤组织的产生，促迹细胞脱分化；促迹细胞的伸长；促进生根。如网味乙酸（IAA）、蔡乙酸（NAA）、IBA（眄陈丁酸）、NOA（蔡氧乙酸），P-CPA（对氯苯氧乙酸）、2,4-D（2,4匸氯苯氧乙酸），2,4,5-T（2,4,5•三氯苯氧乙酸）和ABT生根粉等。生长素的使用浓度通常为0.1〜10mg/Lo（2）细胞分裂素。如玉米素（Zt,6-（4•轻基・3■甲基•反式・2•丁烯氨基）嚓吟）、6-茉基嚓吟（6-BA或BAP）和激动素（Kt,6•咲喃氨基II票吟）、2IP（异戊烯氨基嚓吟）和TDZ（thidiazuronj塵二哇苯基腺）等。作用主要是：第一，促进细胞分裂和扩大（与生长素

5、促进细胞伸长的作用不同），可使茎增粗，而抑制茎伸长；笫二，诱导芽的分化，促进侧芽萌发生长；第三，抑制衰老，减少叶绿素的分解。延缓离体组织或器官的衰老过程，有保鲜的效果。但是，细胞分裂素对根的生长一般起抑制作用。在纟H.培中，细胞分裂索的使用浓度通常为0.1〜10mg/L。细胞分裂索常常与生长索相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长,细胞分化和器官形成。⑶赤霉素。组织培养屮使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究，但在培养基屮很少添加，因为它的作用往往是负面的。乙烯等。5•琼脂或其他支持物除液体悬浮培养外，就目前情况而言，琼脂是一种极

6、为理想的支持物。一般浓度0.4%-1%,质量越差的琼脂用量越大。琼脂作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。6•其他添加剂（含天然提取物、抗生素等）活性炭渗透调节剂抗生素抗氧化剂等。活性炭加入培养基屮的忖的主要是利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响，例如防止酚类物质污染而引起组织褐化死亡。这在兰花组织培养中效果更明显。另外，活性淡使培养基变黑，有利于某些植物生根。但活性炭对物质吸附无选择性，既吸附有害物质，也吸附有利物质，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为1%-5%0活性炭对形态发生和器官形成有良好的效应。在失去胚状体发生能力的胡萝卜悬浮培养细

7、胞屮加入1%—4%活性炭可使胚状体的发生能力得以恢复。7•水水是植物原生质体的纽•成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。配制培养基母液时要丿IJ蒸催水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馄水，以防成分的变化引起不良效果。8.pH培养基的pH因培养材料不同而异，大多数植物都要求在pH5.6-5.8的条件下进行组织培养。常用O.lmol/L的NaOH和0」mol/L的HC1来调节培养基的PH。但需注意两点：第一，经高温高压灭菌后,