临床免疫学—免疫浊度法测免疫.ppt

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1、免疫球蛋白A、M的检测临床免疫教研室实验目的掌握:免疫浊度方法的操作步骤和注意事项；熟悉:临床测定免疫球蛋白的临床意义实验原理属于液相沉淀反应;抗原抗体在合适缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度,从而引起反应体系吸光度的改变。当反应液中保持抗体过量时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出待测抗原的含量。透射免疫比浊法散射免疫比浊法速率比浊法终点比浊法实验试剂与材料1.反应液；2.抗免疫球蛋白血清；3.标准品；4.待测样品；5.吸管，移液器，枪头实验步骤

2、1.准备好试管、枪头17支试管：（4个标准品+1个待测标本）*3+1个试剂空白对照+5个样本空白对照2．按下表进行操作。先准备好所有工作液,再加标准品和待测样品。3.混匀各管，37℃保温10min，波长340nm，分别测出各管吸光度(A)。4.根据吸光度和标准品浓度绘制标准曲线,再根据标准曲线求出样品浓度。IgA：0，0.6，1.5，3，4.5g/lIgM：0，0.6，1.15，2，3g/l操作步骤管号空白管标准管1标准管2标准管3标准管4标本管样品空白管工作液(ml)333333蒸馏水(μl)303ml标准品1(

3、μl)3030标准品2(μl)3030标准品3(μl)303037℃放置10分钟，340nm波长以试剂空白管调零，读取吸光度值。以吸光度为纵坐标，标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。将样品管吸光度代入所绘制的标准曲线,反求出样品浓度。标准品4(μl)3030待测标本(μl)3030注意事项和影响因素:每个标本做3个重复;加样要准确,速度要快;试剂/标本要混匀;抗体质量:特异性,类型(R/H);抗原和抗体的比例:钩状效应?反应条件:pH值,离子强度,离子类型;增浊剂的应用:聚乙二醇(PEG8000),Tween-20标

4、本因素:高血脂,黄疸，溶血，内源性免疫复合物,单克隆丙种球蛋白思考题1.免疫球蛋白分为哪几类？其增加或减少都有哪些临床意义?2.免疫比浊法还能检测哪些临床指标?3.测定血清免疫球蛋白还有哪些方法,不同方法间有何异同?