临床检验仪器学-—PCR核酸扩增仪.ppt

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1、第十三章PCR核酸扩增仪胡昌明2017年12月20日PCR是一种基因检测技术实现PCR技术的仪器PCR产物检测可以是PCR仪器的自身功能也可以用其它仪器进行检测CONTENTS01PCR技术02PCR仪的工作原理及分类03PCR仪的性能、操作与维护04PCR仪的临床应用目录KaryB.Mullis1983年，在一个春天的晚上，心烦意乱的Mullis和他的女朋友驱车前往乡间的小屋度假窗外是一片片绿油油的麦田，Mullis无心欣赏路上生机勃勃的景色，他的心里一直思索着要怎么提高核苷酸合成的效率汽车不断

2、的前进着，轮胎压过路面，留下清晰的印记，路上安静得只能听到车轮旋转和发动机的声音“车轮旋转，对了，就是车轮旋转！”于1983年由美国Cetus公司的K.Mullis建立，获1993年度诺贝尔化学奖，为生命科学领域的研究开创了崭新时代。是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增。模拟细胞内复制过程，于体外试管里建立反应，经过数小时之后，就能将极微量的目的基因或者某一特定的DNA片段放大千百万倍聚合酶链式反应(PCR)一、模拟细胞内复制过程半保留复制连接酶、解旋酶、启动酶、D

3、NA结合蛋白、聚合酶、Mg2+、dNTP模板DNA二、准确的温度控制变性与复性30次循环后靶序列扩增的数量循环数扩增产物量（2n）121＝2222＝4323＝8424＝16525＝32626＝6420220＝1,048,57630230＝1,073,741,824PCR技术的关键要素模拟的体内环境：酶、Mg2+、dNTP引物、模板变性&退火&延伸过程中的温度控制和时间控制变性温度一般>93℃，时间不等退火温度和时间延伸，一般为72℃，时间根据扩增区域片段大小变化PCR仪PCR技术的仪器CONTENT

4、S01PCR技术原理02PCR仪的工作原理及分类03PCR仪的性能、操作与维护04PCR仪的临床应用目录温度对PCR的影响思考：温度控制的要求是什么？温度控制的基本要求1、准确性(不能存在Overshooting和Undershooting现象)2、均一性(尽量不能存在边缘效应)3、升降温的速度(要在短时间内达到需要的温度)4、防蒸发等控温方式水浴锅控温压缩机控温半导体控温离心式空气加热控温一、水浴PCR仪1、准确性高2、均一性好3、升降温的速度快4、PCR体系需要加甘油等防蒸发5、通量大二、压缩机

5、控温PCR基本被淘汰三、半导体PCR仪1、准确性较好(误差0.3内)2、均一性较差(0.5内)3、升降温的速度快（2~5）4、顶盖高温防蒸发，操作方便5、通量较大(48,96,384)四、空气加热离心式PCR仪1、准确性较差(误差0.5内)2、均一性较好(0.1内)3、升降温的速度快（>5）4、离心防蒸发，但加术不方便，操作不方便5、通量较小(32,72)PCR仪的其它功能1梯度PCR仪的其它功能2原位PCR仪的其它功能3产物检测定性PCR仪荧光定量PCR仪数字PCR仪实时荧光PCR仪染料法探针法目

6、的基因报告荧光报告荧光收集荧光思考：实时荧光PCR的加热模式可能是什么？分类2、金属板式1、离心式各孔独立控温的荧光定量PCR仪微量样品无限分液数字PCR仪微流控芯片法微滴法(油包水PCR)CONTENTS01PCR技术原理02PCR仪的工作原理及分类03PCR仪的性能、操作与维护04PCR仪的临床应用目录检测BCR-ABL1融合基因拷贝数问题：如何选择PCR仪？一、性能评估温度控制荧光性能大规模SNP检测,每次几万个反应的实时荧光PCR检测问题：如何选择PCR仪？通量及易用性二、操作三、维护温度控

7、制性能1、PCR管融化；2、同一批次扩增效率差异很大；…………问题：PCR反应假阴性多，请分析原因荧光性能1、荧光强度减弱或不稳定：滤光片或光源原因；2、荧光染料污染；……其它性能1、仪器工作时出现噪声；2、电脑无法启动；3、软件不能打开；…………CONTENTS01PCR技术原理02PCR仪的工作原理及分类03PCR仪的性能、操作与维护04PCR仪的临床应用目录感染性疾病的分子诊断和研究遗传性疾病的分子诊断和研究恶性肿瘤的分子诊断和研究在移植配型中的应用在法医学中的应用在分子生物学其他领域的应用做

8、最优秀的第三方检测机构TOBETHEBESTINDEPENDENTLABORATORIES（此处内容可根据需要更换）