高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养素材二.doc

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1、专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养庖丁巧解牛知识•巧学一、培养基1.培养基的概念及其分类：微生物生命活动所需要的营养基质称为培养基。培养基有很多种，根据物理状态可以分为固体、半固体和液体培养基；根据化学组成可以分为天然培养基和合成培养基，根据用途可分为选择培养基和鉴别培养基等。辨析比较培养基的分类种　类特点及用途物理性质液体培养基工业生产半固体培养基保藏菌种，观察微生物运动固体培养基微生物的分离、鉴定化学成分天然培养基营养丰富、来源广，用于工业生产合成培养基成分明确、稳定，用于分离、鉴定用　途选择培养基加入某种化学物质以抑制不

2、需要的微生物的生长，促进所需微生物的生长，用于分离或培养目标细菌鉴别培养基根据微生物的代谢特点，加入某种指示剂化学物质，用于微生物的鉴别2.培养基的成分：各种培养基的成分是不同的，但是所有培养基都包含微生物生长繁殖所需的必需成分，如水、无机盐、碳源和氮源等，有些微生物生命活动过程中还需要一些微量有机物——生长因子。联想发散碳源和氮源的种类和作用功　能举　例碳　源为微生物提供碳素营养、能源物质，形成代谢产物，构成细胞成分无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮　源为微生物提供氮素营养、合成蛋白质、核酸、含氮

3、代谢产物无机化合物：氮、氨、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等3.培养基的其他条件：除了营养物质外，培养基还要满足微生物生长所需要的温度、酸碱度以及氧气含量等条件。不同微生物所需的这些条件是不同的，例如培养真菌时，pH要调整到5.0～6.0之间，培养细菌时要调整到6.5～7.5之间，培养放线菌时要调整到7.5～8.5之间。二、无菌技术1.无菌技术的内容（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。（2）对培养微生物所用的器皿、接种工具和培养基等器具进行灭菌（3）实验操作的过程要保证无菌。（4）要避免灭过菌的材料

4、再次被污染。2.灭菌方法(1)灼烧灭菌：主要用于接种环（针）或其他金属工具的灭菌。(2)干热灭菌：将待灭菌的物品放入干热灭菌箱内，在160～170℃的情况下加热1～2小时进行的灭菌。4(3)高压蒸气灭菌：将待灭菌的物品放入盛有适量水的高压蒸气灭菌锅内，把锅内水加热至沸腾，将其中的冷空气彻底排除后，将锅密闭后继续加热使锅内温度上升，压力增加，最后温度可以达到100℃以上，常用的灭菌锅灭菌时压力为100kPa，温度为121℃，维持15～30min,即可达到彻底灭菌的结果。（4）紫外线灭菌:这种方法只能适用于表面灭菌和空气灭菌。深化升华灭菌所依

5、据的原理基本都是使菌体内的蛋白质和核酸发生变性，从而达到杀菌的效果.三、制备培养基和纯化大肠杆菌1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：首先要根据培养基的配方要求，计算出各种成分的用量，然后用天平准确地称量，对于牛肉膏和蛋白胨等易吸潮的物质称量时要迅速，称量完成后要及时盖上瓶盖；为了使各种成分混合均匀，需要将它们溶化，溶化后千万不要忘记调整pH；溶化后的培养基分装完成后放入高压蒸气灭菌锅内进行灭菌（平板培养基一般是灭菌后再分装）。深化升华培养基的配置要遵循一定的原则，第一，目的要明确，要根据所培养的微生物的种类、培养的目的选择原料；第二，营养要协

6、调，配制培养基时必须要注意各种营养物质的浓度和比例，否则会产生不良后果；第三，pH要适宜，这是因为各种微生物适宜生长的pH范围不同。2.纯化大肠杆菌时需要注意的问题（1）每次划线之前都要将接种环上的剩余物质烧掉以灭菌，整个操作完成后也要将接种环灭菌。（2）接种环灼烧完成后，要等到其冷却后才能用于接种，以防培养基溶化、划线不整齐或杀死菌种。（3）作第二次划线时，要从上一次划线的末端开始，使微生物随划线次数的增加而减少，并逐步分散，最后可在平板表面得到单个菌落。（4）用涂布法接种时，将涂布器的末端浸在盛有体积分数为70％的酒精的烧杯中，取出时要

7、让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。（5）操作过程都要在火焰附近的无菌区进行。（6）整个过程中要注意防火。疑点突破（1）未接种的培养基表面若有菌落生长，说明培养基已被污染，必须更换或者重新灭菌。（2）在接种大肠杆菌的培养基上可以观察到独立的菌落，有光滑型菌落、粗糙型菌落、黏液型菌落等。（3）培养12h和24h菌落的大小不同，后者菌落大，灰色加深，光泽度强。（4）若在培养基中观察到不同形态的菌落，则说明菌液不纯或者操作过程中被杂菌污染。问题•探究问题1配制培养基时，除了营养要齐全外，各种营养物质的比例也要适中，

8、而且还要调整好pH、温度等，试从多个方面探究其原因。思路:虽然微生物个体微小，但是其代谢过程丝毫不比多细胞生物简单，它也要不断地进行吸水、吸收营养物质、代谢、排泄