实验八、九 微生物的生理生化反应.ppt

《实验八、九 微生物的生理生化反应.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、微生物的生理生化反应实验九、十一、目的要求1.了解细菌的一般生化反应；2.了解细菌的生化鉴定方法其原理。二、实验材料菌种：大肠杆菌；枯草杆菌；变形杆菌；自己划线分离的大肠杆菌。培养基：糖发酵培养基（紫红色液体）H2S试验用培养基（固体、试管）蛋白胨水培养基(吲哚实验）(液体）淀粉水解用培养基（固体、平板）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红实验）(液体）三、实验原理及方法由于各种微生物的新陈代谢类型不同，因此，对各种物质利用后所产生的代谢产物也不同，我们可以用化学反应来测定微生物的代谢产物，这种反应称为生化反应。生化反应常用来鉴别在形态或其它方面不易区

2、别的微生物，例如：肠道细菌中，大肠杆菌和伤寒杆菌，二者在形态上不易区分，但前者能发酵乳糖，后者不能。因此可以从它们能否发酵乳糖来区别它们，所以微生物的生化反应是微生物分类鉴定的重要依据之一。微生物的生理生化反应原理1、糖发酵试验（含碳化合物的分解利用）绝大多数细菌都能利用糖类作为能源及碳源，但是细菌的分解糖类的能力上有相当大的差异。发酵后产生的有机酸：乳酸、醋酸、丙酸等（溴甲酚紫变色范围pH5.2~6.8,pH<5.2黄色，pH>6.8紫色）发酵后产生的气体：甲烷、H2、CO2等（杜氏小管内有气泡）微生物的生理生化反应原理2、产硫化氢试验某些菌

3、能分解含硫的有机物或无机物产生硫化氢（H2S），H2S遇金属盐类，如铅盐、铁盐等，则形成黑色的硫化铅或硫化铁的沉淀物。从而可断定H2S的产生与否。本实验采用含有柠檬酸铁铵的培养基穿刺培养，看是否有黑色沉淀。微生物的生理生化反应原理3、甲基红试验某些细菌在糖代谢过程中，将培养基中的糖分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基变酸，加入培养基中的甲基红指示剂[pH4.2（红色）-6.3（黄色）]，可使培养基由原来的桔黄色变为红色，即甲基红阳性反应。微生物的生理生化反应原理4、淀粉水解试验（生物大分子的分解利用）微生物对大分子的淀粉不能直接利用，必须靠产生的

4、胞外淀粉酶将其分解后才能吸收利用。淀粉遇碘液呈蓝色，但在淀粉被细菌水解的区域，遇碘不再呈蓝色，这可作为细菌产生淀粉酶的证据。结果：有水解圈—淀粉水解实验阳性；无水解圈—淀粉水解实验阴性.用接种环取少量枯草杆菌在平板的一边划“+”字形接种（或点种），另取少量大肠杆菌在平板的另一边接种，在各培养皿底部标明菌名和组别。置37℃温箱中培养16～20小时。5．吲哚试验（含氮化化合物的分解利用）吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。微生物的生理生化反应原

5、理四人一组操作配制各类培养基用无菌操作技术接种37℃培养24h观察并分析实验结果试验名称被接菌种1被接菌种2被接菌种3空白对照1.糖发酵大肠杆菌自备大肠杆菌枯草杆菌不接种2.H2S试验大肠杆菌自备大肠杆菌变形杆菌不接种3.甲基红试验大肠杆菌自备大肠杆菌枯草杆菌不接种4.淀粉水解实验大肠杆菌自备大肠杆菌枯草杆菌5.吲哚试验大肠杆菌自备大肠杆菌枯草杆菌不接种接种方案１.糖发酵试验：经培养后，指示剂呈黄色者表示为性，同时观察小套管中有无气泡产生。“+”表示产酸；“⊕”表示产酸产气；“-”表示阴性。2.H2S试验：培养后取出观察，看有无黑色沉淀产生.有

6、“+”3.吲哚试验：在培养液中先加入乙醚约1毫升（使呈明显的乙醚层），充分振荡，使吲哚溶于乙醚中，静置片刻，使乙醚层浮于培养基的上面，这时再沿管壁慢慢加入吲哚试剂5~10滴，观察有无红色出现。有红色环出现者为阳性，黄色者为阴性。4、淀粉水解试验：打开皿盖，滴加少量碘液于培养基上，轻轻旋转培养皿，使碘液均匀铺满整个平板。如果在菌周围出现无色透明圈，说明淀粉被水解。透明圈大小说明该菌水解淀粉能力的大小。5、甲基红试验（M·R试验）：沿管壁加入甲基红指示剂3～4滴上层呈红色者为阳性。实验结果试验名称糖发酵H2S试验甲基红试验淀粉水解实验吲哚试验大肠杆

7、菌自备大肠杆菌枯草杆菌变形杆菌空白对照试验结果：“+”表示阳性反应；“-”表示阴性反应；“⊕”表示产酸产气（糖发酵）思考题细菌的生化反应试验意义何在？