生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定.doc

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1、一、实验原理1.可溶性还原糖牛•物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、杲糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分了内都含有游离的具还原性的半缩醛疑基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定牛物组织中可溶件还原糖，而不能鉴定可溶忤•非还原糖及不能溶解的糖。斐林试剂为O.lg/mL的NaOH和0.05g/mL的C11SO4配制而成的淡蓝色Cu(OH)2沉淀的悬浊液，葡萄糖溶液在加入斐林试剂后，在加热条件hCu(OH)2被还原为砖红色的CU2O沉淀，而匍萄糖氧化成繭萄糖酸。其反应式为：-CHO+Cu(OH)2丄.COOH+CI^OJ砖红色2■脂肪的鉴定苏丹

2、111(苏丹IV)为一种脂肪染色剂(易溶解于酒精，不溶解于水)。苏丹III染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹IV染液遇脂肪的颜色反应为红色。其反应式为：脂肪苏丹III(建jV)•橘黄色(红色)3•蛋口质的鉴定将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩腺。反应式为：nh2nh2nh>c—()()+(3—^()»SjHNFI：<个IIINH>NH2C=()Inh2双缩腺在碱性环.能和硫酸铜结合成红紫色的络化物。蛋白质分子屮含有的肽键结构与双缩腺结构相似，因此，蛋白质可与双缩腺试剂发生颜色反应：-CO一NH・(类似双缩尿HqNOC-NH-CONH2结构)酸性条件下与Cu触作用形成紫色

3、络合物——双缩尿反应二、实验步骤与现象1.可溶性还原糖选材：含糖量较高的门色或近」订I色,苹果、梨最好。制备组织样液［显色反应2mL组织样液••••••制过取去皮、切块、研磨（用单层纱布）（2mL）刚配制的斐林试剂2mL开水加热2min现象：呈现蓝色2•脂肪的鉴定变成砖红色取材：花生种了（浸泡3—4h），去皮，将了叶削成薄片选取绘薄的薄片移至载玻片中央在薄片上滴加苏丹III染液2—3滴，染色2-3min制片」滴加体积分数为50%的酒楮溶液1—2滴，洗去浮色吸去余液，滴1・2滴蒸谓水，盖上盖玻片观察：先在低倍镜下找到己着色的薄片，肩川烏倍镜观察结果：有被染成橘黄色的脂肪微粒3.蛋白质

4、的鉴定选材与制备黄豆组织样液（或鸡蛋白稀释液）组织样液：［黄豆浸泡T去皮T切片T研磨T过滤T滤液］显色反应mL样组液无色A2mL现象:双缩豚试剂B3-4滴紫色或紫红色三、实验成功的关键与注意事项：1•实验成功的关键在于实验材料的选择：（1）.在做口J溶性还原糖的鉴定实验屮，最理想的实验材料是含糖量较高的工物组织（或器官），而且组织的颜色较浅，以好是口色或近于白色的植物组织，这样可以避免材料自身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、门妙卜。（2）.在做脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功，要求实验技能较高，不

5、妨改成刮取花生子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。（3）・在做糖和蛋白质的实验时,故好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋，鉴定z前•需要留出•部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色做比较，这样可增强说服力。—2■注意事项:A.可溶性还原糖（1）斐林试剂很不稳定,故应将组成斐林试剂的甲液（O.lg/mL的NaOH溶液）和乙液（0・05g/mL的CUSO4溶液）分别配制、储存，使用时，再临时配制，将4〜5滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。（2）鉴定可溶性还原糖，加热试管时，应该用试管夹夹住试管上部，放入盛开水的人烧

6、杯加热；注总试管底部不接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以提起试管夹，使试管与沸水接触面减少，以免溶液溢出。■4•脂肪的鉴定（3）在鉴定脂肪的实验中，若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡3〜4小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。（4）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色，染色和洗浮色时间不宜过长（否则酒精将脂肪溶解影三、实验成功的关键与注意事项：1•实验成功的关键在于实验材料的选择：（1）.在做口J溶性还原糖的鉴定实验屮，最理想的实验材料是含糖量较高

7、的工物组织（或器官），而且组织的颜色较浅，以好是口色或近于白色的植物组织，这样可以避免材料自身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、门妙卜。（2）.在做脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功，要求实验技能较高，不妨改成刮取花生子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。（3）・在做糖和蛋白质的实验时,故好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋，鉴定z前•需要留出•部分样液，