实验一普通光学显微镜的使用、细菌染色和包结构观察.doc

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1、沖尹必岁实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型:综合实验实验项目名称：普通光学显微镜的使用、细菌染色与包结构观察学生姓名：专业：环境工程学号:_同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018年乞月18_0一、实验目的和要求（必填）装订线二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（系统、软件或平台）四、操作方法与实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得注：不同类型的实验课对实验报告可有不同要求，各个学科的实验报告可以根据自己的学科特点做适当的调整，但上述基本内容中的第一、二、六条为必须填写的内容。一、实验目的和要求1.了解光学显微镜的基本

2、构造、原理，并找握其操作与维护知识2.掌握油镜的使用方法与操作要点3.学习细菌涂片的方法与基本技术4.掌握细菌的简单染色法与革兰氏染色法5.学习采用悬滴法在高倍镜下观察细菌的运动性6.熟练掌握显微镜油镜的使用技术二、实验内容和原理本次实验内容主要有四项；(1)利用油镜观察标准片上球菌、杆菌、螺旋菌的形态并记录、(2)利用悬滴法观察枯草杆菌的运动、(3)运用简单染色法观察牙垢细菌、(4)利用革兰氏染色法观察大肠杆菌与枯草杆菌。1.光学显微镜的构造普通光学显微镜由机械系统与光学系统两部份组成。机械系统包含镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。光学系统包含目镜、物镜、聚光

3、器、反光镜。2.细菌形态结构细菌按其外形可分为球菌、杆菌、螺旋菌。球菌是外形呈圆球形或椭圆形的细菌，直径0.5〜1微米。外形为杆状的细菌称杆菌，常有长宽接近的短杆或球杆状菌，如甲烷短杆菌属(Methano-brevibacter)；长宽相差较大的棒杆状或长杆状菌，如枯草芽孑包杆菌(Beic订lussubtilis)、梭状杆菌(Bacteriumfusiformis)；分枝状或叉状菌，如双歧杆菌属(Bifidobacterium)；竹节状(两端平截)，如炭疽芽泡杆菌(Bacillusanthracis)等。按杆菌细胞的排列方式不同则有成对的双杆菌、呈链状的链杆菌，另外，常有栅状

4、、“八”字状以及由鞘衣包裹在一起的丝状等多种。典型的杆菌有大肠杆菌、枯草杆菌、链杆菌、变形杆菌。螺旋状的细菌称螺旋菌，一般长5〜50微米，宽0.5〜5微米，根据菌体的弯曲可分为：①弧菌(Vibrio):螺旋不足一环者呈香蕉状或逗点状,如霍乱弧菌(Vibriocholerae):②螺菌(Spirillum):满2〜6环的小型、坚硬的螺旋状细菌，如小螺菌(Spirillumminor)；③螺旋体(Spirochaeta):旋转周数多(通常超过6环)、体长而柔软的螺旋状细菌，如梅毒螺旋体(TreponemapaUidum)o3.细菌染色原理细菌的染色方法包含简单染色与复合染色法。简

5、单染色法是采用一种染料对细菌进行染色的方法。由于细菌细胞直含有大量的蛋白质、和酸等两性电解质其等电点约在PH2〜5,其在强酸性溶液中解离出碱性基团而带止电荷，在碱性或偏酸性的溶液中则带负电荷，因此在一般环境下菌体多带负电荷°而碱性染料电离后带止电荷，可与细菌的负电和相结合，故一般多用碱性染料进行染色；而对于在酸性环境下的细菌(如代谢产物为酸性物质的细菌)则会采用酸性染料。由于细菌经简单染色后，只能观察细菌的大小形状和细胞排列，不能鉴别细菌，也不能观察细菌的特殊结构。为此，微生物工作者创建了复合染色法。复合染色法是采用两种或两种以上染料使细菌着色的染色方法。革兰氏染色法就是一种

6、复合染色法。它于1884年由丹麦病理学家ChristianGram创建，该染色法已广泛应用于细菌分类学鉴定、临床用药等。由于这种染色方法具有鉴别细菌的功能，因此它又是种鉴别染色法。根据革兰氏染色反应，可把细菌区别为革兰氏阳性(G-)细菌和革兰氏阴性(G)细菌。细菌通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的”结晶紫-碘”的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、

7、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。三、主要仪器设备（必填）1.菌种：培养12-18h的枯草杆苗（Racillussubtilis）斜面培养物、牙垢细菌、大肠杆菌（Eshcrichiacoli）24小时的斜面培养物、枯草杆菌CBacilussubilis）12^16小时的斜面培养物。。2.标本片:细菌三种基本形志的染色标本（1套/组）。细菌特殊形态标本以