实验一 显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法.doc

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1、实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法一、显微镜的使用普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。以往最简单的显微镜仅rti几块透镜纽•成，而当前使用的显微镜rh—套透镜组成。普通光学显微镜通常能将物体放大1500-2000倍。(一)显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的恥合，才能发挥显微镜的作用。1、显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件(1)镜座镜廉是显微镜的基木支架，它由底

2、廉和镜臂两部分组成。在它上面连接有载物台和镜筒，它是用来安装光学放大系统部件的基础。(2)镜筒镜筒上接接忖镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜(装在转换器下)间的暗室。从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。因为物镜的放大率是对…定的镜筒长度而言的。镜筒长度的变化，不仅放大倍率随之变化，而且成像质量也受到影响。因此，使用显微镜时，不能任意改变镜筒长度。国际上将显微镜的标准筒长定为160mm,此数字标在物镜的外売上。(3)物镜转换器物镜转换器上可安装3—4个接物镜，一般是三个接物镜(低倍、高倍、油镜

3、)。Nikon显微镜装有四个物镜。转动转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上血的接目镜构成一个放大系统。(4)载物台载物台屮央有一孔，为光线通路。在台上装有弹簧标木夹和推动器，其作用为固定或移动标木的位置，使得镜检对彖恰好位于视野屮心。(5)推动器是移动标本的机械装置，它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的，好的显微镜在纵横架杆上刻行刻度标尺，构成很精密的平血廉标系。如果我们须重复观察己检查标木的某一部分，在第一次检查时，可记下纵横标尺的数值，以后按数值移动推动器，就可以找

4、到原来标木的位置。(6)粗动螺旋粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间跖离的机件，老式显微镜粗螺旋（7）微动螺旋向前扭，镜头下降接近标木。新近出产的显微镜（如Nikon显微镜）镜检时，右手向前扭载物台上升，让标木接近物镜，反Z则下降，标木脱离物镜。用粗动螺旋只可以粗放的调节焦距，要得到最清晰的物象，需要用微动螺旋做进一步调节。微动螺旋每转一圈镜筒移动0.1毫米（100微米）。新近出产的较高档次的显微镜的粗动螺旋和微动螺旋是共轴的。2、显微镜的光学系统显微镜的光学系统rh反光镜，聚光器，接物镜，接目镜

5、等组成，光学系统使物体放大,形成物体放大像。（1）反光镜较早的普通光学显微镜是用白然光检视物体，在镜廉上装有反光镜。反光镜是由一平面和列一凹面的镜了组成，可以将投射在它上面的光线反射到聚光器透镜的屮央,照明标木。不用聚光器时川凹面镜，凹面镜能起会聚光线的作川。川聚光器时，一般都川平面镜。新近出产的较高档次的显微镜镜朋上装冇光源，并冇电流调节螺旋，可通过调节电流大小调节光照强度。（2）聚光器聚光器在载物台下面，它是由聚光透镜、虹彩光圈和升降螺旋组成的。聚光器可分为明视场聚光器和暗视场聚光器。聚光器安

6、装在载物台下，其作川是将光源经反光镜反射来的光线聚焦丁样品上，以得到最强的照明，使物彖获得明亮清晰的效果。聚光器的高低可以调节，使焦点落在被检物体上，以得到最大亮度。一般聚光器的焦点在其上方1.25mm处，而其上升限度为载物台平面下方0.lmm。因此，要求使用的载玻片厚度应在0.8—1.2mmZ间，否则被检样品不在焦点上，影响镜检效果。聚光器前透镜组前面还装有虹彩光圈，它可以开大和缩小，影响着成像的分辨力和反并，若将虹彩光圈开放过大，超过物镜的数值孔径时，便产生光斑；若收缩虹彩光圈过小，分辨力下降

7、，反羌增大。因此，在观察时，通过虹彩光圈的调节再把视场光阑（带有视场光阑的显微镜）开启到视场周缘的外切处，使不衣视场内的物体得不到任何光线的照明，以避免散射光的干扰。（3）物镜安装在镜筒前端转换器上的接物透镜利用光线使被检物体第一次造像，物镜成像的质量，对分辨力有着决定性的影响。物镜的性能取决于物镜的数值孔径（numericalapeature简写为NA）,每个物镜的数值孔径祁标在物镜的外壳上，数值孔径越大，物镜的性能越好。物镜的种类很多，可从不同角度来分类：根据物镜前透镜与被检物体Z间的介质不同

8、，可分为：%1干燥系物镜以空气为介质，如常用的40X以下的物镜，数值孔径均小于1。%1油浸系物镜常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜头，其放大率为90X-100X,数值孔值大于1。根据物镜放大率的高低，可分为:①低倍物镜指1X—6X,NA值为0.04—0.15；②屮倍物镜扌旨6X—25X,NA值为0.15—0.40；③高倍物镜扌旨25X—63X,NA值为0.35—0.95；④油浸物镜指90X—100X,NA值为1.25—1.40。(4)目镜目镜的作用是把物镜放大了的实像再放大一次，并把