资源描述：
《临床医学毕业论文蛛网膜下腔出血大鼠模型脑干组织谷氨酸受体表达的动态变化.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、XX大学毕业论文化姓名：2014年6月25日蛛网膜下腔出血大鼠模型脑干组织谷氨酸受体表达的动态变化作者：毕云枫王玉妍王丽娜【摘要】F1的探讨亲代谢型谷氨酸受体(mGluR)在蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠脑干表达的动态变化。方法采用枕大池二次注血法建立Wistar大鼠SAH模型。应用颅多普勒超声检测和RTPCR方法分别观察蛛网膜下腔出血大鼠基底动脉血流速度和谷氨酸受体在脑干的变化。结果①超声检测显示与对照组相比，枕大池注血大鼠第1天基底动脉血流加快，第7天达到高峰，第14天血流速度下降，第21天未见明显变化,表明大鼠出现了脑血管痉挛
2、(CVS)。②RTPCR结果显示SAH模型组术后第1、7天脑干组织屮mGluR4和mGluR6mRNA的表达率均比对照组下降，第14、21天差别不显著。结论大鼠SAH的急性期出现了CVS,mGluR4和mGluR6可能参与了大鼠SAH急性期CVS的形成。【关键词】蛛网膜下腔出血；亲代谢型谷氨酸受体；脑血管痉挛蛛网膜下腔出血(SAH)后，由于脑血管痉挛(Cerebralvasospasm,CVS)＞微循环障碍和颅内压增高等因素，造成较高的患者神经功能伤残率和病死率(1〕。造成神经细胞坏死或凋亡的主要原因是谷氨酸在细胞外间隙的聚积。亲
3、代谢型谷氨酸受体(Metabotropicglutamatereceptor,mGluR)作为突触前谷氨酸自身受体，能减少谷氨酸的释放。这种作用通过抑制电压依赖性的Ca2+通道，也可以非Ca2+依赖性方式如激活突触前K+通道来实现(2)。FI前尚未见CVS与mGluR的有关报道。本研究采用枕大池二次注血法复制SAH模型，观察SAH后发生CVS时脑干组织mGluRmRNA表达的动态变化，探讨谷氨酸受体的表达与CVS发生机制的关系。1材料与方法1.1实验动物分组与模型的制备采用枕大池二次注血法（3）制备大鼠SAH模型:Wistar大鼠
4、48只，体重（250±20）g,雌雄各半，由吉林农业大学实验动物屮心提供，随机分为：正常对照组（8只）；假手术组（8只）；SAH后第1、7、14、21天处死组（每组8只）。大鼠均采用10%水合氯醛按照0.35ml/100g的剂量进行腹腔注射麻醉，SAH模型经眼球后静脉丛抽取无抗凝口体血，两次向枕大池共注射大鼠无抗凝自体血0.3ml,假手术组注射等量生理盐水。1.2大鼠基底动脉血流速度的检查正常对照组、假手术组、SAH模型组分别于第1、7、14、21天在腹腔注射麻醉下经颅多普勒超声（TCD）检测大鼠基底动脉最大血流速度（Vba）来判
5、定其脑血管痉挛程度。1.3RTPCR法检测人鼠脑干组织屮3利
6、谷氨酸转运体亚型mRNA表达的变化脑干总RNA提取参照UltraspecTMIIRNAIsolationSystem（BiotecxLaboratories,INC）说明书进行，逆转录成cDNA,进行PCR反应。GAPDH引物序列为正义：5’GGGTGATGCTGGTGCTGAGTATGT3',反义:5，AAGAATGGGTGTTGCTGTTGAAGTC3，,片段大小为700bp。mGlu4引物序列为正义：5’TGTCGGCTGACTGTGAGGTG3’，反义:5，TG
7、TCGGCTGACTGTGAGGTG3，,片段大小为572bp。mGlu6引物序列为正义：5，CAAGTAGCAAGGTTGAGTGT3Z,反义：5，GGTTGTAGTGTTGGATCAAG3,片段大小为279bp。PCR反应条件：变性94°C,30s；退火mGlu4为60°C,mGlu6为53°C,30s；延伸72°C,45s,30个循环。1.4统计学处理数据均以x±s表示，采用t检验。2结果2」大鼠脑血管痉挛发生情况的评判正常对照组与假手术组相比基底动脉血流没有明显改变。SAH与正常对照组相比，第1天基底动脉血流加快（P<0.
8、05),第7天血流速度达到高峰(PV0.05),第14天时血流速度下降，第21天时未见明显差异，提示大鼠出现了CVSo与正常对照组比较：1)P<0.05图1TCD法检测各组大鼠基底动脉最大血流速度(略)2.2大鼠脑干组织mGlu4和mGlu6mRNA的表达将各实验组大鼠用颅多普勒超声检测后，处死取出脑干组织，提取总RNA,采用RTPCR方法检测脑T组织mGlu4和mGlu6mRNA的变化情况。结果如图2所示：与正常对照组和假手术组相比，SAH模型组mGlu4和mGlu6mRNA在脑干的表达于第1、7天下降，第14、21天未见明显差
9、异。1〜6：正常对照组，假手术组，SAHk7、14、21d组图2大鼠脑干组织中mGlu4和mGlu6mRNA的表达(略)3讨论SAH诱发脑血管痉挛和微循环障碍，使脑组织血流灌注不足(1)继发脑缺血。屮枢神经系统内对神经细胞兼有兴奋和毒性的兴奋性氨基
