制备型高效液相在中药多组分分离中的应用(论文).pdf

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1、万方数据王贤兰等．制备型高效液村jn：·l，药多组分分离中的应用·669··文献综述·制备型高效液相在中药多组分分离中的应用王贤兰1’2综述吴红菱3，邓微Ⅵ，汪选斌¨如审校(1湖北中医药大学药学院，湖北武汉441000；湖北医药学院2附属人民医院中药药理实验室；3药学院，湖北十堰442000)高效液相色谱法(highperformanceliquidchro—matography，HPLC)具有分离效率高、分析速度快、选择性好、检、狈4灵敏度高和应用范围广的特点，广泛应用于各种药物及其制剂的分析测定，尤其在生物制品和中药等复杂体系的组分分离分析中发挥着极其

2、重要的作用。其分类按分离机制可分为分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法和空间排阻色谱法；按固定相和流动相的相对极性可分为正相色谱法和反相色谱法；按用途和操作方式可分为分析型和制备型两类。其中分析型HPLC主要用于分析样品组成，而制备型HPLC(preparativehi【ghperform．anceliquidchromatography，PHPLC)则用于按一定纯度要求获取目标产品，如中药多组分的分离制备、标准品的制备、高纯度的生物活性物质的制备等。PHPLC已成为当代高效分离纯化技术研究的前沿，本文就其原理及在中药分离中的应用做一综述。1PHPLC概

3、述PHPLC是在分析型HPLC的基础上发展起来的一种高效分离纯化色谱技术，但它又不是分析型HPLC的简单放大，它们之问存在着很多不同之处，如上样量、流速和理论基础等都有不同，最主要的就是它们的用途不同。如上所述，分析型HPLC是要全面反映样品组成成分的信息，不需要收集某些特定的馏分；而PHPLC主要考虑的因素是目标产物的纯度、产量、生产周期及成本等。因此，和分析型HPLC相比，PHPLC在操作系统和操作参数的优化上也相应的有许多不同之处。、PHPLC的装置系统主要由输液泵、进样系统、色谱柱、检测器、馏分收集器、数据采集与处理系统等组成¨J。现代制备高效液相

4、色谱柱具有内径大、‘[通讯作者]汪选斌，博士，主任药师，硕士生导师，E—mail：xuanbin．w@163．con柱短、呈圆饼状的特征，目前使用的柱结构形式主要有空管柱、轴向压缩柱和径向压缩柱旧J。色谱柱采用的填料较分析型HPLC来说有其特殊的要求：(1)高的机械强度；(2)高负载量；(3)合适的颗粒大小和窄的粒度分布范围；(4)可大量供应，批间的重现性好【3J。为了提高柱产量，PHPLC一般采用柱超载的方式进行操作，包括：(1)质量超载：使用小的注入体积，但样品浓度增加；(2)体积超载：保持较小的样品浓度，但样品体积增加¨J。所以在对PHPLC分离纯化

5、进行优化时，影响的因素有很多，如柱尺寸(柱长、柱内径)、填料、上样量以及流动相的组成、流速等”J。为达到提高分离效率、分离速度和获得较大的生产能力等目的，须在满足分离要求的前提下，按具体的要求，适当改变柱尺寸、填料粒度大小、上样量和流动相组成等。2PHPLC在中药多组分分离制备中的应用中药是基于中医理论指导下应用的药物，按其来源分为植物药、动物药、矿物药等，有效成分复杂多样，包括苷类、黄酮类、生物碱类、萜类、内酯类、皂素、鞣酸质、挥发油等，为顺应中药现代化发展的要求，从中药中分离纯化出主要有效成分并对其药理作用和结构进行针对性研究具有重要的现实意义。目前P

6、HPLC主要用于分离和制备中药有效成分的单体和标准品。2．1单体的分离纯化制备2．1．1苷类化合物：苷类又称配糖体，是糖或糖的衍生物如氨基糖、糖醛酸等与另一类非糖物质通过糖的端基碳原子连接而成的一类化合物。其共性部分是糖，而苷元部分几乎包罗了各种类型的天然成分，故性质各异。在分离制备苷类化合物时，只有综合考虑糖和苷元部分的性质，才能选择出合适的分离柱、流动相和洗脱方式，制备出高纯度的单体。陈文娟等∞。71利用半制备高效液相色谱的分离纯化技术对牛耳朵中的苯乙醇苷类化合物进行了研万方数据·670·湖北医药学院学报(JHBUM)2011‘r10月，30(6)：6

7、69究，先利用MCI柱层析制备化合物粗品，然后在E．clipseXDB—C】8(9．4mm×250mm，5斗m)半制备柱上，以甲醇一水为流动相，流速为4mL／min，用梯度洗脱方式，进行组分分离纯化，在较短的时间内(26min)一次性从牛耳朵中制备分离得到5种苯乙醇苷类单体，纯度均高于98％。七叶皂苷是娑罗子(SemenAesculi)提取物中最主要的活性成分旧J，属于三萜皂苷类化合物，其主要药理作用为消炎抗渗，其中七叶皂苷A和七叶皂苷B含量最高。湛建峰等p1利用PHPLC对七叶皂苷的主要成分进行了研究，采用制备色谱柱watersHRC】8(40mmX10

8、0mrn，6肛m)，以乙腈：1％醋酸(28：72)为流动相，流速为