高效液相—核磁共振联用技术在中药分析中的应用

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1、药物分析综述题目：液相—核磁共振联用技术在中药分析中的应用组员姓名：黄志华、窦文渊、彭啟柏所在学院：药科学院专业班级：药学05（5）班学号：0503501564、0503501565、0503501535日期：2008-6-26液相—核磁共振联用技术在中药分析中的应用摘要:HPLC一NMR联用技术是一种高效、快速获得混合物中未知化合物结构信息的术，近年来，它在药物研究中的应用日益广泛。本文介绍了HPLC一NMR联用技术及其在中药分析中分离、结构鉴定、构型分析等方面的一些研究应用。关键词:液相—核磁共振联用技术(LC－NMR)中药分析中药是中华民族

2、的瑰宝，数千年来，中药对中国人民的医疗保健发挥了巨大的作用特别是随着我国加入世界贸易组织后，以仿制为主的西药研制将遇到严重挑战，中药己成为我国最有优势的研究与开发领域。充分利用现代科学技术的方法和手段，按照国际认可的医药标准规范，研究开发能够正式进入国际医药市场的中药产品，推动中药的现代化，不仅具有经济效益也具有巨大的社会效益。在这其中，中药及其复方的药效物质基础研究是中药现代化研究的重点与突破口，它关系到药材、饮片，中药制剂和中成药产品等的质量控制等。中药的真伪鉴别和品质评价是临床应用、成药制备、中药科研不可缺少的前提条件。我国药材品种繁多，存

3、在南北差异、同名异物、同物异名等情况，混淆品极多，疗效也各不相同。而且中药的有效成分和环境、产地、采收季节等因素也有很大关系。加之近年来，假冒伪劣中药充斥市场，为控制中药质量、保证临床用药安全和有效，需要对中药进行严格鉴定。随着科技不断发展，从最原始的眼观、鼻闻、口尝、手摸到显微鉴别和理化鉴别，再到光谱、色谱等现代技术的应用，中药鉴定技术越来越多元化。但每一种分析技术均有其适用范围和局限性，将单一的分析技术联合起来，不仅能获得更多的信息，而且可能产生单一分析技术所无法得到的新的信息。因此，联用技术已成为中药鉴定发展的一个重要方向。HPLC虽然是复

4、杂成分的分离中最有力的工具，微处理机的应用，简化了仪器操作，并能够实现全自动化，应用极为广，通过UV可变波长检测器，可获得一些化合物的附加信息，但信息量非常有限，对活性成分的结构鉴定帮助不大。NMR能够提供大量的结构信息，包括立体化学信息(在某些情况下，它不需其他光谱的信息，就能解析未知物的结构)。因此NMR对中药6中活性成分的结构鉴定有很大的帮助。毫无疑问，HPLC－NMR联用技术对中药的分析研究中活性成分的分离和结构鉴定的速度将大大提高。以下对HPLC—NMR联用技术操作及在中药中的分析应用作简单的介绍。1.HPLC—NMR联用技术HPLC—

5、NMR联用技术的研究开始于20世纪70年代,早期发展十分缓慢，主要是因为当时NMR仪的灵敏度还较低，溶剂峰抑制问题也尚未解决。近年来HPLC-NMR联用技术的迅速发展得益于NMR波谱仪磁场强度的提高、HPLC—NMR专用探头的设计及溶剂峰抑制技术的发展，从而解决了动态变化、灵敏度及溶剂抑制(尤其是梯度系统)的问题。当时该仪器可采用停止流动模式,随后不久连续流动模式打通,从此以后,随着仪器设计、磁场强度、流动探头等方面研制水平的提高与改进,以及有效的压制溶剂峰的脉冲序列的建立,使得这项技术现在已广泛应用到实际工作中。1.1　基本操作模式LC－NMR

6、联用技术主要有三种操作模式:连续流动操作模式、停流操作模式和峰存贮操作模式。1.1.1连续流动（on-flow）操作模式:样品由HPLC常规检测器（UV等）出口，用毛细管直接连接到专用NMR探头的液槽，毛细管的长度为2m。随着分离连续获得NMR图谱，一次分析可得到所有组分的NMR信息，然而由于样品溶液浓度低，NMR采样时间短（通常扫描16次），很难得到分辨率良好的NMR图谱。1.1.2停流(stop-flow)操作模式：当样品色谱峰最高点到达NMR液槽的中心位置时，停止流动，进行一维或二维NMR采样，直至获得良好的NMR图谱。然后再启动输液，恢复

7、正常HPLC条件，继续下一色谱峰的NMR测定。在出峰时停泵，可以获得较好的NMR图谱。1.1.3峰存贮操作模式：当欲分析组分较多而各组分的含量较低时，为避免由于多次暂停LC分离而带来峰扩散现象，可采用峰存贮操作模式。正常色谱分离时当UV检测到色谱峰时将流出物收集并暂时贮存到不同的毛细管回路内，由NMR谱仪逐一离线测定各流分。该模式下的样品需要量低于停流操作。这样既不中断HPLC过程，又能获得全部成分的良好的NMR图谱。除用毛细管回路贮存色谱成分外，还有小柱截留法。1.2　溶剂峰抑制方法大多数HPLC体系采用反相柱,使用2种或3种溶剂的混合物作洗脱

8、液,除D2O外,其它氘代溶剂作为常规洗脱液太昂贵。因此,在线反相HPLC-NMR实验中常采用含质子的溶剂,如CH3CN和CH3OH等。常