微生物的培养.doc

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1、微生物的培养实验二土壤中微生物分离纯化培养实验三菌种保藏实验四细菌形态观察及单染色实验五放线菌及霉菌形态观察实验六革兰氏染色及芽抱染色实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定实验八微生物直接计数法及测微技术实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十水中细菌总数的测定实验十一细菌细胞的生化反应实验实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；拿握干热天菌、高压蒸汽及过滤除菌的操作方法O二、实验原理合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的

2、不同，培养基也冇不同的种类和配制方法。生长繁殖Z用。三、试剂与器材微孔滤膜过滤器、银子等。四、实验内容2•干热灭菌：装入待灭菌物品一升温一恒温一降温一开箱取物3•高压蒸汽灭菌：加水一装物品一加盖一加热一排冷空气一加压一恒压f降压回零f排汽f取物f无菌检查4.过滤除菌：组装灭菌一连接一压滤一无菌检查一清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1•要严格按配方配制。2.调pH不要过头。3.干热灭菌耍注意物品不耍堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放物、取物。4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压

3、力要适当，不可太猛太快，滤膜耍注意清洗保存。实验二土壤中微生物分离纯化培养一、实验目的掌握微生物培养方法。二、实验原理从混杂的微生物群体中获得只含冇某…种或某…株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。释涂布平板法步骤：倒平板一制备土壤污水稀释液一涂布一培养一挑菌落；平板划线法步骤：倒平板一标记培养基名称一划线。三、试剂与器材无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。四、实验内容1.土壤稀释液的制备2.微生物分离纯化：稀释涂平板法，平皿划线分离法，微生物培养技术五、关键步骤及注意事项2•常握含菌培养基的配制，严格控制温度。2•平板划线应防

4、止染菌，同时应注意划线深度及密度。实验三菌种保藏一、实验目的1.掌握常用的几种不同的菌种保藏方法。二、实验原理三、试剂与器材低温冰箱（一30°C）、超低温冰箱和液氮罐等。四、实验内容1.斜面保藏法2.液体石蜡法3.穿刺保藏法4.砂土管保藏法5•冷冻真空干燥保存法五、关键步骤及注意事项[.清楚各种保藏方法的优缺点，针对不同要求选择适宜的保藏方法。2.液氮冻存操作应防止冻伤。实验四细菌形态观察及单染色一、实验目的1.了解简单染色法的原理，并掌握其操作方法。2.学习并常握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。3.巩固显微镜（油镜）的使用方法。4.初步认识细

5、菌的形态特征。二、实验原理细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，与背景形成鲜明的对比，以便在显微镜下进行观察。根据实验目的不同，可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等。简单染色法是最基本的染色方法,是利用单一染料对细菌进行染色。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色。三、试剂与器材3.器材显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）等。四、实验内容简单染色法：涂片一干燥一固定一染色〜水洗一干燥一镜检五、关键步骤及注意事项1•涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应尽可能均匀，2.水洗步骤水

6、流不宜过大，过急，以免涂片薄膜脱落。实验五放线菌及霉菌形态观察一、实验冃的2.学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操作方法。3•初步了解放线菌、霉菌的形态特征。二、实验原理菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝（简称“基丝”），基丝生长到一定线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。抱子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生抱子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及抱子的形态特征是识别不同种

7、类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和抱子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征。本实验釆用插片法。面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征,而且便于观察不同生长期的形态。三、试剂与器材培养基。2•实验器材经灭菌的：平皿、玻璃纸、无菌吸管、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片、接种环、接种铲、银子、显微镜等。四、实验内容倒平板一接种一插片一培

8、养一镜检五、关键步骤及注意事项1•倒平板要厚一些，接种时划线要密。2.插片时耍有