实验一 小鼠睾丸、附睾及输精管精子采集、运动能力检测与结构观察.doc

《实验一 小鼠睾丸、附睾及输精管精子采集、运动能力检测与结构观察.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、羡检九d、氯睾丸、附睪反』俞端;管橢子Ml採、运渤龟力检测与绪构现寨任课教师：吴雨龙任镌班.级：07级卖验目的1・认识雄性小亂睾九.附睾、输精管等生殖器官结构及住置特点;2•拿握小亂睾九、附睾及输精管精子采集方启；3•事握血细胞计数板出精子计数和运动能力检查的方法；4•通过睾丸、附睾及输精管精子运动能力检测，认识精子衣睾丸产生后，A附睾内成熟的过程；卖验目的5.拿握精子抹片方法;6.拿握染色法进行精子结构观察和顶体结构观察的方法，认帜精子的正常结构;7.使学生得到小氯精子操作的基础训练o卖验原理、丿丿哺乳动杨的精子直睾九内形成，并必须经过蛊附睾内发生一糸列形态、生理和生化方

2、面的麦化而最终达到成熟，才能获得向前运动的能力>这种向前运动能力的荻得是精子受精能力的重要指标。哺轧动杨精子包括头部和尾部两个主要部分，硕部介于头部和尾部之间，形成头部和尾部的连接。精子头部主要由核组成,卖验原理、丿丿头部顶端是顶体，顶体包阖核的前端形成帽状。精子颈部变细并形成头部和尾部的连接。尾部是精子的运动器官，可以分为中段、主段和末端。卖验用wJ、—丿编、恒温水浴锅、注射器、注射针头.哌管、试管架、血细胞计数板、剪刀、解剖刀、解剖徴、载玻片.盖玻片等。2•药品、试

3、剂：精子操作液（CZB液或KSOM液丿、0.5%龙胆紫酒精液、36%甲醴溶液、确酸缓冲液CPH6.8J、

4、精子固定液（福余马林确酸盐缓冲液丿、吉姆萨工矗液。卖验用w3.卖殓动杨：选择60目蛉以上，体重达到32-35g的昆朗种1•精子采集:左手捏小亂尾部，右手持緩子，或以图所示方区，以硕部脱臼法处死小氯。使处死的小氯仰卧，用75%的酒精棉球询毒腹部开口部住菠毛及皮肤。剪开腹壁，暴療生殖糸统。无菌分需睾九、附睾及输精管。衣含培养液的表面皿中，用眼科剪除去睾丸.附睾及输精管周阖的糸膜及脂肪，并冲洗干净，以免血液或脂肪球混入液体妨碍精子观案。将分需并请洗干净的睾九.附睾及输精管，用眼科剪再分需为睾九.附睾尾及附带的小段输精管.其余部分的输精管3部分，弃去附睾头。采集睾丸精子时，将睾九横

5、切为如干段或组织块，放蛊表面皿中，加1ml培养液，用眼科剪轻轻挤压睾丸组织块，把精子挤入培养液中，去掉组织块。置37°C.5%CO2.饱和湿度培养箔孵育20min,使精子令行散开。采集附睾尾精子时，将其剪成几段。采集输精管精子时，由于小亂输精管非常细，不能直接冲洗管腔，将输精管放入含有1ml培养液的表面皿内,在卖体显微镜下，用一只眼科异物针固走输精管，用另一支异杨针向相反方向纵向撕开输精管，精子会浮游到培养液中。将丸块输精管组织拨开，用吸管连同精子吸出液体部分，裝于2ml具塞试管中暂存。2.精子运动能力检查：用厲管吸取精液，放于血细胞计数扳的计数童与盖玻片接触处，使精液自然

6、流入计数宝中。计数中间5个中方格（对角5个或田角及中间丿内80个小方格的精子数，计数值为X。计算时，先计教死精子的X］值，然后计数核置于50°C水浴锅中的槍瓷盘中，在50°C条件下5〜10min杀死精子，计数总精子数X?值，CX2-X】丿/X?为表示精子运动能力的精子活力值。计教矗每份精子用3个计数核重复计数3次，取平均值。3•精子整体结构观察:取1小满椽存精液疫载玻片上，将样品厲以拉的形式制成抹片。用0.5%龙胆紫酒精液染色3min,自然干燥，水洗后镜检。镜下可观案到丸多教为结构正常的精子，部分为畸形希于，如头都畸鱼（如头部巨丸.痩小.细长.圖形.轮廊不明显.皱缩.缺损.

7、叹头等丿.颈部畸形3•精子整体结构观察：（颈部膨犬.纤细.屈折.不全.巩体等丿>尾部中段畸形（膨夬.纤细.弯曲.屈折.不全.叹体等丿>尾部主段畸形，然后分类计教。有的精子尾部发育未完成，为未成熟精子，可计为畸形精子。4•精子顶体结构观察:精液抹片t然干燥10〜20min,以1〜2ml的福余马林确酸缓冲液固定15min,水洗后方然干燥。用姬姆萨工作液染色90min,水冼，庵干。置于1000信显微镜下用油镜观察，计教顶体异常精子。镜下可观案到丸多数精子顶体结构正常,部分精子顶体异常,精子顶体异常主要表现为肿胀.缺损.部分或完全脱囂。卖殓注意事项X.J剖开小氯腹腔时，剪刀头要向上

8、，以避免剪破力I腔血管和内脏，影响卖殓结果的观察。1•雄性小氯的生殖薜官主要由哪几个部分组成?2•绘制小氯精子结构图？3•从外观上看小氯精子由哪几部分组成？你都观案到了哪几种畸形结构？将典矍的畴形结构进行图示。顶体缺损顶体脱落顶体空泡正常精子顶体结构