【精品】细胞培养常见问题及其解决.doc

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1、细胞培养常见问题及其解决1.如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没冇固圧的培养条件。在MEM屮培养的细胞，很可能在DMEM或M199屮同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMT-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。2.何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。3.可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有英特肚使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养棊，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。4可否使用与原先培养条件不同之

2、血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重耍的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极人的影响。來白不同物种的血淸，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错谋常会造成细胞无法存活。5何谓FBS,FCS,CS,HS?FBS(fetalbovineseium)和FCS(fetalcalfserum)是相同的意思，两者都是指胎牛血清,FCS乃借误的使用字眼，请不耍再使用。CS(calfserum)则是指小牛血清乙HS(horseserum)则是指马血清。6培养细胞时应使用5%或10%C02?或根本没有影响？一•般培

3、养基中人都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决泄细胞培养时应使用的C02浓度。当培养基屮NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基屮NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5%C02培养细胞。7.Hank*s平衡盐溶液(HBS膜在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank*s平衡盐溶液(HBS)和Earle*s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？HBS和EBS的主耍差别在于碳酸氢钠的水平，在Eagles(2.20L)中比在Hanks(0.

4、35g/L)屮高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值°Eagles液在空气水平的CO2屮，溶液会变磁Hanks液在C02培养箱屮会变酸。如果希望在CO2培养箱屮保存组织，需耍用Eagles液如果仅仅是清洗将耍在细胞培养基屮储存的组织，用Hanks液就可以了。8・细胞之接种密度为何?依照细胞株皐本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重耍原因。9.悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬

5、高，H到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。10・冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37弋水槽屮快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶屮取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。11.细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO?除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝人部分细胞株(包括•悬浮性细胞)，在解冻之后,应H接放入含有10-15ml新鲜培养慕之培养允瓶屮，待隔天再置换

6、新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免人部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。12.附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如何处理？—般使用之trypsin-EDTA浓度为0.05%lrypsin-0.53mMEDTA.4Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管屮,保存于-20。。避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低,并可减少污染之机会。13•欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，英离心速率一般为300xg(约I,000rpm),5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡。14.

7、细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养棊是含5-10%DMSO(dimethylsulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养棊均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出人量热能，故不可将DMSO豆接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。15.DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissueculturegiade之DMSO(如SigmaD2650),英本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管屮，保存于4°C,避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而肆山

8、有害物质，并可减少污染之机会。若耍过滤DMSO,则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜。16•冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于4七30〜60分钟—（・20弋30分钟*）^-80°C16-18小时（或隔夜）-*液氮槽vap