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1、9年第期乙型病毒性肝炎的白细胞移动抑制试验上海市静安区中心医院姚光弼秦龙吴曼芳张利民,oB用白细胞移动抑制试验测定急慢性乙型肝炎病人对的特异性细胞免疫反应结果在急性肝,炎的急性期(血清内检到HsBAg)多数病人的白细胞移动指数(Ml)值正常恢复期当HsBAg转阴,。,后大部份病人出现移动抑制现象因而认为对HsBAg的特异性细胞免疫反应在清除体内HBV的过程中是有一定作用。的、:.近年来认为乙型病毒性肝炎的感染过程与三制备白细胞悬液1取上述含有大量。,。。机体的免疫反应有着密切的关系急性肝炎转白细胞的血浆离心(20。。转/分)10分钟2去变
2、为慢性肝炎系由于特异性细胞和体液免疫反上清液,加人ank产s34,,H液一毫升混匀离,,。.,应低下机体不能将病毒清除造成持续的病心(2000转/分)10分钟3去上清液再加上〔`’。,an`s,,毒感染本文报告用白细胞移动抑制试验Hk液洗涤如此洗涤3次最后一次离B。A,。.测定急慢性乙型肝炎病人对Hg特异性细心后弃去全部上清液4用培养液配成每毫。7。胞免疫反应升含6~8x10的白细胞悬液备用、:.白细胞移动抑制试验的方法四白细胞培养法1将上述细胞悬液混、...一试剂:1Hank,s缓冲液(配法见:病匀后分装于4一6支毛细管中(内径08~1
3、1。.:,,,毒实验诊断手册)2培养液的组合41培养毫米长7~8厘米)装至毛细管的河处将空,,。.,,液80%小牛血清20%混合后用5%碳酸端封闭2封闭端向下置于空试管中用水。.IN..。.,氢钠液(或盐酸)校正pH至72一740平离心(2000转/分)10分钟3取出毛细管在3.3:3,溶。4.%明胶溶液称取明胶克于少许生理液体和细胞界面处用砂轮划痕折断将装满1,,1白,盐水中使成0毫升然后分装试管每管毫细胞一段的毛细管用少许凡士林固定于平,,。.,4,升高压灭菌冰箱保存备用4肝素抗凝剂底凹孔培养皿内(孔径18毫米厚毫米)每份(:1250
4、023,500单位/毫升)取注射用肝素液(含单标本做一孔作为测定组另一排为对照组。。.:位)用灭菌生理盐水稀释25倍即成分装灭菌(不加抗原)5测定组加人16稀释的抗原试管,0.2,。5.:,,内每支毫升保存备用抗原培养液对照组加人不含抗原的培养液盖上:,。.“,乙型肝炎表面抗原阳性血清(对流法16吐)玻片637C恒温箱(取水平位置)15~24小时:。。用时以培养液按16稀释取出观察结果、:.、:.二白细胞的分离1采取静脉血液3毫五结果观察及计算方法1测量白细胞。.:,升加于肝素抗凝管内摇匀2抗凝血3份加1移动范围毛细管内的白细胞培养后向管
5、外、O,。份预先溶解冷却至37C左右的3%明胶液混移动呈圆形或扇形用接目测微器置于凹玻。.。.,,,匀3置37℃恒温箱15~30分钟4取出试管片上用放大镜观察直接测量每支毛细管的。.用灭菌尖吸管吸取上层含有白细胞丰富的血浆白细胞移动范围平均直径2计算白细胞移动,。(ML):层吸时略带些红细胞指数一鱼,二兰立三壑胆加丛厦亘登鱼鱼里真鱼丝翌塑塑理透塑上=璀鱼鱼担Ml2一3支毛细管的白细胞不加抗原后移动范围直径的平均数(对照组)1.01士0.12(SD),.。。洲定结果均为正常值125一o77、、,0.1.,:,无一正常人18例Ml为74一40
6、平二急性乙型肝炎13例黄疽型10例下苏灭}药。。,,901133黄疽型型例于急性期又发病一天测能力本文的研究表明在急性肝炎的急性期,0.541.1,0.94士0.15(sA,定M工为一平均为与血清内检到HBg这时多数病人的Ml值正.。,s,正常组比较p)005)其中2例的M工低于常恢复期当HBAg转阴后大部分病人出现,。。,s正常表示对HBsAg有细胞免疫8例于恢复移动抑制现象因而推想对HBAg的特异性期(32一64天,6,V的过程)复测Ml例低于正常出现细胞免疫反应在清除体内HB中是有,0.士0.,。,一HBsHBV同样移动抑制M工平均
7、值为7016与正常一定作用的当然抗对于清除。.0。,组比较有显著差异(p<01)也是相当重要的一般情况下机体感染HBV、,,一s,三慢性肝炎2例(迁肝10例慢活肝12后4个月在血液内可检出抗HB在持续例:5,1.00士.043,HBV感染的慢性肝炎或携带者血液内,)例低于正常平均值为与往往。.。一HBs,正常组比较无显著差异(p>005)不能测到抗我们的观察也与此相同、:s,,一s四其它HBAg阳性的肝硬化3例原在4例慢性肝炎病人中仅2例抗HB滴度,。:8川。发性肝癌4例M工均在正常范围(被动血凝法)大于1因此我们认为对s讨论HBAg的细
8、胞免疫和体液免疫反应在清除体,。白细胞,Dudley移动抑制试验是一种在体外测定内病毒感染过程中都是很重要的等!“’。,sA机体特异性细胞免疫反应的方法原理是认为对HBg的细胞免疫反应的强弱与
