2_顾其芳——志贺修订2012.10厦门.ppt.ppt

《2_顾其芳——志贺修订2012.10厦门.ppt.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验标准的修订GB4789.52012.10修订背景1.任务来源受卫生部食品安全综合协调与卫生监督局委托，按照食品安全国家标准审评委员会的工作安排，对该标准进行修订。2.项目负责与协作单位本标准负责起草单位是上海市疾病预防控制中心协作单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、河南CDC、江西CDC、江苏CIQ、广西CDC3.完成情况在修订工作中共收集专家反馈意见120余条（采纳90%以上）条，形成标准的草案稿、送审稿。2011年11月在北京召开第一届食品安全国家标

2、准审评委员会检验方法与规程分委员会（微生物工作组）第五次会议，提交《食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验》（送审稿），委员审查通过了该标准。主要的肠道病原菌之一,引起人类细菌性痢疾尽管大量的分类学资料认为这类细菌应包括在大肠杆菌（E.coli）内，但一些临床微生物学家往往仍当作一个独立的菌属来对待。伯杰手册(1984)中将其分为4个血清群(种)A群痢疾志贺氏菌（S.dysenteriae）B群福氏志贺氏菌（S.flexneri）C群鲍氏志贺氏菌（S.boydii）D群宋内氏志贺氏菌（S.

3、sonnei）。这些菌群还可根据血清学再进一步分型。志贺氏菌培养特性志贺氏菌属于革兰氏阴性短杆菌；无芽孢、无荚膜、无鞭毛、不运动需氧或兼性厌氧，营养要求不高，能在普通培养基上生长能利用葡萄糖与其他碳水化合物，产酸不产气。除A群外，B、C、D群均能发酵甘露醇，除D群外，A、C和D群均不发酵乳糖；D群具有鸟氨酸脱羧酶对可疑的食品，包括在使用前需用手处理的或轻微加热的产品，且其酸度范围由PH5.5至6.5之间。一般来说，当食品中含有大量的大肠菌群，大肠杆菌与沙门氏菌时，同时即可疑含有志贺氏菌。现行GB

4、/T4789.5-2003标准不足处1.采用的GN增菌肉汤,37℃需氧培养,4小时后大肠菌的生长速度大大超过志贺氏菌,所以检测效果较差2.使用的分离平板SS对志贺1型有抑制3.检验方法与现行的其它国家的标准存在差异修订原则1.以原国标为基础，保持与原标准的连续性考虑基层单位方法的可操作性，对增菌步骤、培养条件尽可能简化；生化反应方面亦尽量沿用原标准中的方法2.与国际接轨的原则该标准的起草内容主要参考了国际标准组织ISO标准，部分参考采用了美国FDA、NMKL等标准3.与现有已颁布的新版国家标准协

5、调统一参考了已颁布的2008版国标，在样品的前处理步骤，培养条件的选择，文字描述等方面尽量保持一致。修订依据1.GB/T4789.5—20032.国际标准化组织ISO21567-2004Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs—HorizontalmethodfordetectionofShigellaspp.3.美国食品药品管理局FDABacteriologicalAnalyticalManual(8thEdition，2001年)Chapter6Shi

6、gella4.北欧食品分析委员会NMKLTheNordiccommitteeonfoodanalysisNO.1511995shigellabacteriadetecyioninfoods5.《卫生防疫检验》1979年3月第一版6.《痢疾防治手册》2006年9月第一版增菌：用志贺增菌肉汤使处于濒死状态的细菌恢复活力选择性平板分离培养：XLD+MAC/显色培养基生化试验：可采用API20E或VITEK2血清学鉴定：特异性诊断血清鉴定到种。志贺氏菌操作流程检验方法“食品卫生微生物学志贺氏菌检验方法”

7、GB/T4789.5－2003修改的内容增菌部分志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）原国标：GNISO：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）FDA：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL和3μg/mL）NMKL：志贺氏菌增菌液（新生霉素0.5μg/mL）GN增菌液GramNegativeEnrichmentBroth配方：（g/L）胰蛋白胨20.0葡萄糖1.0磷酸二氢钾1.5磷酸氢二钾4.0甘露醇2.0枸橼酸钠5.0去氧胆酸钠0.5氯化钠5.0pH值7.0 ± 0.1      (

8、25℃)原理：胰蛋白胨提供碳源、氮源、维生素和矿物质；葡萄糖和甘露醇提供糖类；枸缘酸钠和去氧胆酸钠抑制革兰氏阳性细菌，但不影响沙门氏菌和志贺氏菌的生长；磷酸二氢钾和磷酸氢二钾是缓冲剂；氯化钠维持均衡的渗透压。志贺氏菌增菌肉汤ShigiellaBroth原理：胰蛋白胨提供氮源和生长因素，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为缓冲剂，氯化钠维持稳定的渗透压，葡萄糖为可发酵糖。培养条件：41.5℃±1℃厌氧培养原国标：37℃需氧培养ISO：41.5℃厌氧培养FDA：42℃（除宋内其他志贺菌)和44℃（宋内）厌氧培养