HE染色 ppt.ppt

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1、HE染色科七-尼日特-2012110207HE染色介绍苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining)，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。染色分类易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性(basophilia)嗜酸性(acidophilia)；中性（neutrophilia)：对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱。组织内的蛋白质构成蛋白

2、质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的

3、苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中称蓝色，所以细胞核被染成蓝色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不

4、同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。HE染色步骤二甲苯脱蜡，5min×2次。100%乙醇：3min×2次。95%乙醇→90%乙醇→80%乙醇→70%乙醇各2min。蒸馏水洗，3min。苏木精（Ehrlich）染液，10min。自来水洗。5%-1%的盐酸乙醇，数秒到数十秒，蒸馏水速洗。淡氨水，10–30秒。自来水洗（LM下镜检细胞核分色质量）。流水冲洗，3min。HE染色步骤1%伊红Y染液，5min。蒸馏水速洗。70%、80%、90%乙醇速洗。95%乙醇，30s–1min，LM下镜检细胞核与细胞质颜色对比情况，注意标本面朝上放置切片。

5、100%乙醇，3min×2次。二甲苯透明，5min×2次。树胶封固切片。观察染色结果。我的切片，用手机照的。