he染色实验报告

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1、华中农业大学动物科技动物医学院he染色与免疫组织化学染色实验报告1实验目的及意义1.1了解石蜡切片的制作过程1.2掌握he染色与免疫组织化学染色的基本原理以及染色方法1.3熟悉he染色与免疫组织化学染色后的读片知识2实验方法及步骤2.1石蜡切片制作及he染色步骤2.1.1取材与固定：从人或动物新鲜尸体上取下组织块（一般厚度不超过0.5厘米）投入预先配好的固定液中（10%福尔马林）使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。2.1.2脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作

2、脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换岀组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。2.1.3浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器（如折叠一小纸盒），倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。2.1.4切片前的准备工作：先将包埋的每块组织周围过多的石蜡切去，四周留约2mm的石蜡块，块两边必须切成平行的直线。将玻片擦洗干净

3、后均匀涂抹簿薄的一层蛋白甘油，放置冰箱备用。2.1.5切片与贴片：将预冷的蜡块固定于切片机上，调节切片厚度为6微米，切成薄片。切下的薄片往往皱折，放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45°C恒温箱屮烘干。2.1.6脱蜡至水华屮农业大学动物科技动物医学院二甲苯i20分钟，二甲苯ii20分钟，无水乙醇3分钟，95%酒精3分钟，80%酒精3分钟，70%酒精3分钟，自来水洗5分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。2.1.7染色：苏木素液7分钟，自来水洗5分钟，1%盐酸溶液分化30秒，自来水洗5分钟，1%氨水返蓝1

4、0秒，自来水洗20分钟，95%酒精3分钟，1%伊红酒精溶液2分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。2.1.8脱水和透明：95%酒精2分钟，无水酒精i2分钟，无水酒精ii2分钟，二甲苯i5分蚀，二甲苯ii5分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。2.1.9封固：将已透明的切片滴上中性树胶，盖上盖玻片封固，放入37°C烘箱。2.2sabc染色步骤2.2.1脱蜡至水：二甲苯i20分钟，二甲苯ii15分钟，100%酒精2分钟，95%酒精2分钟，80%酒精2分钟，70%酒精2分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并

5、作用相应时间。2.2.2流水冲洗5分钟（水流要小）2.2.3用蒸馅水配置新鲜的3%双氧水（30%双氧水1：9配制,配100ml）,室温封闭15分钟，注意避光。2.2.4蒸镭水洗5分钟，重复2次。2.2.5热抗原修复，将切片浸入0.01m枸盐酸盐缓冲液中，置微波炉内高火5分钟，低火20分钟，完后自然冷却。2.2.6取出切片放入染色缸屮pbs洗5分钟，重复3次。2.2.7取出切片放入湿盒中，滴加5%bsa封闭液（覆盖满组织为宜），室温20分钟。2.2.8甩去多余液体（擦去周围的流痕），滴加一抗（覆盖满组织为宜）注：阴性对

6、照滴加pbs,放入4°C冰箱过夜。2.2.9放入染色缸中pbs洗5分钟，重复3次。2.2.10取出放入湿盒中滴加二抗（覆盖满组织为宜），室温30分钟。2.2.11取出置染色缸中pbs洗5分钟，重复3次。放冋湿盒中加sabc（覆盖满组织为宜），室温30分钟。华中农业大学动物科技动物医学院2.2.12取出置染色缸中pbs洗5分钟，重复3次。2.2.13dab显色,取一试管加lml单蒸水，b、c、a试剂按顺序各一滴加入试管中混匀,滴加于切片上，观察是否终止显色。2.2.14终止显色用单蒸水洗5分钟，重复2次。2.2.15苏

7、木素衬染1分钟，流水冲洗5分钟。2.2.16脱水透明，70%酒精3分钟，80%酒精2分钟，90%酒精2分钟，95%酒精2分钟,95%酒精ii2分钟,100%酒精i2分钟,100%酒精ii2分钟,100%酒精iii2分钟二甲苯i8分钟，二甲苯ii5分钟，依次按上述顺序加入相应试剂并作用相应时间。2.2.17中性树胶封片,放入37°C烘箱。3实验结果3.1he染色结果华屮农业大学动物科技动物医学院aibbibib：狂犬病毒包涵体（内基氏（negri）小体）图1狂犬病毒感染后脑组织病变he染色a:小脑浦肯野细胞内包涵体x4

8、00;b:脑神经元内多处包涵体x400狂犬病的病理变化在显微镜下主要表现为神经元退变，淋巴细胞和单核细胞浸润，胶质细胞增殖以及特征包涵体形成。狂犬病毒包涵体又称为内基体，直径华中农业大学动物科技动物医学院约3〜10nm,边缘整齐，内有1〜2个状似细胞核的小点，主要111现在大脑海马区及小脑，其他部位也可见，在病变神经元胞浆内成圆形或卵圆形，苏木