生化实验-血糖的测定.ppt

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1、血糖的测定实验四血糖及血糖水平的概念：血糖：指血液中的单糖：葡萄糖血糖水平：血浆中葡萄糖浓度血糖总维持在恒定水平：3.9~6.7mmol/L调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。血糖水平异常：⑴高血糖及糖尿病；⑵低血糖临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。测定血糖的意义体液糖的测定项目：①血糖浓度测定②口服糖耐量试验③糖化血红蛋白试验④糖化血清白蛋白测定⑤胰岛素测定⑥C-肽测定等测定方法无机化学法：Folin-Wu法有机化学法：邻甲苯胺法酶法

2、：葡萄糖氧化酶法血糖测定的常用方法葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理（1）葡萄糖＋O2＋H2O（2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚葡萄糖酸＋H2O2葡萄糖氧化酶（GOD）H2O＋红色醌式物质过氧化物酶（POD）Trinder反应505nm光吸收法测定相对血糖浓度分光光度计的原理分光光度技术电泳技术层析技术离心技术生物化学的四大研究技术：光的波粒二象性物质的光吸收性分光光度计的原理分光光度计的工作原理朗伯-比尔定律朗伯定律：A=k1L比尔定律：A=k2C朗伯-比尔定律：如同时考虑液层厚度和溶液浓度对吸光度的影响，则吸光度与溶质的浓度和溶液的厚度的乘积成正比。A

3、=KLC朗伯-比尔定律应用A标=KC标LA样=KC样L标准品法测定未知样品含量C样=A样A标×C标1.接通电源，调整波长。2.比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，注意：加入样品量不超过比色杯体积的2/3。3.调模式为“透射比”，对空白对照进行调“0”（开盖）和调“100”（闭盖）。4.调模式为“吸光度”，将空白对照调“0”，测定待测样品的吸光度值。分光光度计的使用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测激素对血糖浓度的影响方法（1）取4支试管，按下表加入试剂:试剂标准管(ml)测定管1(ml)测定管2(ml)空白管(ml)血清样品–0.020.02–葡萄

4、糖标准液0.02–––蒸馏水–––0.02酶酚混合试剂3.003.003.003.00实验步骤：充分混匀，37℃水浴中保温20min；冷却至室温后，505nm处比色比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。（2）计算：依据朗伯-比尔定律：A=KLC标准管葡萄糖浓度：5mmol/L测定管葡萄糖含量（mmol/L）＝测定管光密度标准管光密度×5正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的2/3。血糖测定应在取血后2小时内完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。酶酚混合液一般现用现配。注意事项补充实验测2-3名同学早餐后和空腹血糖的水平，并

5、比较二者之间的区别。使用怡成JPS-5型血糖仪。小结1、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法测定血糖的原理。2、分光光度计的正确使用。3、实验操作中存在的问题。其他常用血糖测定方法介绍葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法Folin-Wu法邻-甲苯胺法原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使Cu2+还原成Cu+，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量。评价稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还原物质的影响。空腹正常血糖参考值4.4~6.7mmol/L或80-120mg/dLFolin-Wu法其他常用血糖测定方法介绍葡萄糖氧化

6、酶-过氧化物酶比色法Folin-Wu法邻-甲苯胺法原理葡萄糖在冰醋酸中加热脱水后，与邻-甲苯胺缩合产生蓝绿色的席弗(Schiff)碱，颜色的深浅与葡萄糖含量成正比，可通过比色法测得血糖含量。评价结果较可靠、但邻-甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性。空腹正常血糖参考值3.9~6.1mmol/L或70-110mg/dL邻-甲苯胺法葡萄糖氧化酶法：该法特异性高，反应条件温和，能反映血中葡萄糖的真实含量，且已推广出试剂盒，广泛应用与临床。Folin-Wu法：该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质均可产生同样的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原物质，但仍存在其他非糖还原物质，故该法

7、其参考值较其他方法略高。邻-甲苯胺法：该法涉及强酸、加热等反应条件，不便于大规模检测，且使用的试剂具有毒性，临床和科研上已很少采用。思考题1、为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考值存在差异？葡萄糖氧化酶法：3.9~6.1mmol/LFolin-Wu法：4.4~6.7mmol/L邻-甲苯胺法：3.9~6.1mmol/L2、肾上腺素使血糖升高的机理是什么？能够升高血糖的激素有哪些？