TLC分离定性.ppt

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1、分析1141-第5组TLC分离定性实验目的1、了解薄层色谱法分离有机物的方法。2、掌握薄层色谱法的实验操作技术。基本操作过程1、根据被分离物质的性质选择吸附剂和胶黏剂；2、薄层板的制备；3、薄层板的活化；4、点样；5、展开；6、显色，Rf值计算。吸附剂和胶黏剂的选择吸附剂：硅胶胶黏剂：羧甲基纤维素钠吸附剂：胶黏剂=1:3薄层色谱的制备薄层板的好坏将决定分离的效果。薄层板应该尽量均匀且厚薄一致。倾注法：将调成糊状物倒在玻璃板上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃棒或角匙铺平并用手捏住玻璃板一角，轻轻碰敲桌面，使薄层表面均匀并除去糊状物中的气泡。薄

2、层板的活化涂好的薄层板要进行活化。活化的目的使其失去部分或全部水分，具有一定的活度。活化好的薄层板放在盛有无水氯化钙或变色硅胶的干燥器中保存，一周内使用，超过一周应再次活化。点样将待测样品溶在极性尽可能低的溶剂中配成0.5%～1%的试液。用一支平口的细毛细管蘸取少量样品溶液点在薄板上，点样基线距底边1-2cm，样点直径在1-1.5mm之间,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，距边缘在5mm（以免边缘效应影响分离）。点样时必须注意勿损伤薄层表面。正常斑点应是圆形或椭圆形色斑。展开展开和纸层析想似，薄层层析在密闭的层析缸中，用上行法、下行

3、法或近水平法展开。对于软板采用近水平方向展开，薄层与水平方向夹角约为10°~20°，倾斜角过大，薄层易脱落，过小，影响分离。对于硬板，多采用近垂直方向展开。如下图：近水平方向展开近垂直方向展开展开时先将展开剂放入层析缸内，使液层厚度为5~7mm。然后将以点好式样的薄层板放入缸内，使薄层浸入展开剂中约为5mm。宝板上的原点不得浸入展开剂中。待展开剂前缘达一定距离，或色斑以明显分离时（一般为10~15cm），层析可以终止。取出后，在前缘作出标记，待展开剂挥发后，进行定性检出。显色展开后的薄板晾干溶剂后可采取若干方法对板上的组分进行定位。1、光学

4、检测：对于无色样品，可采用带荧光剂的吸附剂做薄板，展开后在紫外光（254nm或365nm）下显暗色斑点。优点是方便、不破坏被检测物质。2、碘蒸气法：对于在光学条件下不显色的物质，可将薄板置于含有少量碘晶体的密闭容器中。许多物质能与碘可逆的作用呈棕色斑点。3、试剂显色：必须根据被分析化合物的性质来选择某一显色剂，以喷雾方式直接喷到薄层板上可显示不同颜色的斑点。某些显色剂喷了以后还要在80-100度加热几分钟才能显色，如茚三酮与氨基酸的显色反应。Rf值的计算Rf值的计算只要用尺测量原点到色斑中心的距离除以原点到溶剂前沿的距离即可。谢谢观赏！